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细胞传代培养

来源:飒榕旅游知识分享网
实验十 细胞传代培养

实验目的:

以原代培养的小鼠胎儿细胞为材料,学习动物细胞培养中最常用的消化法进行细胞传代培养的实验过程,为细胞纯化、冷冻保存、生长曲线的测定和细胞活性检查等实验奠定基础。 实验原理:

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也使细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法,同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞传代培养直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 实验材料与设备:

超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜,培养箱、卡氏培养瓶、废液缸、酒精灯、吸管、滤膜。

Hanks液、D-Hanks液、胰蛋白酶、NaOH、1640培养基。 实验步骤:

1、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去,用2ml Hanks液清洗一次。 2、加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去(约需3min),加入10ml Hanks培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3min。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉。 4、加入5ml的培养液,用吸管吸取培养液将贴壁的细胞吹打成悬液,吹打勿用力过猛,以免伤害细胞。

5、将悬浮液分成等份接种到另外两到三瓶中,加培养液到3ml,塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。每三天换液一次,观察贴壁生长情况。 思考题:

1.什么是细胞株?什么是细胞系?两者相同吗?

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