银杏中微量元素及黄酮含量的测定

６期　（总第１７９期）　ＴＹ。ＦＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧＳＣＩＥＮＣＥ　ＺＨＯｕＵＮＩＶＥＲＳＩＪＯＵＲＮ　。ＦＧＵＩ贵工程应用技术学院学报ＮＯ．６．２０１５　Ｖｏ１．３３　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｎｏ．１７９　银杏中微量元素及黄酮含量的测定　曾　造，文竹，欧阳菲　（贵州工程应用技术学院化学工程学院，贵州　毕节　５５１７００）　摘要：用原子吸收和原子荧光光度法测定银杏叶、银杏果皮及果仁样品中Ｆｅ、Ｍｎ、Ｃｕ、ｚｎ、Ａｓ、ｓｅ的含　量，考察索氏、超声波、冷浸法等不同提取方法对样品中黄酮类化合物的提取率影响，并以荧光光度法测定　其总黄酮含量。实验表明，目标元素在样品中的含量存在较大差异，银杏叶中微量元素含量高于果皮果仁；　而银杏叶中总黄酮含量为：黄银杏叶＞绿银杏叶＞银杏果皮＞银杏仁。　关键词：银杏；黄酮；微量元素；荧光光度法；原子吸收光度法　中图分类号：０６２　文献标识码：Ａ　文章编号：２０９６—０２３９（２０１５）０６—０１３８－０５　银杏，又名白果，属裸子植物，是我国特有的古老树种之一，我国的银杏占全世界银杏总量的百分　之七十以上。Ⅲ银杏有广泛的应用前景，可用作风景观赏、食用药用等，其突出的药用价值是生物、化　学、医学界等的热门研究之一。　≈黄酮类化合物是银杏中主要有效活性成分之一，它不仅具有抗癌抗肿　瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老等重要的药理作用，还是天然色素和保健　食品的添加剂。［３１芦丁是黄酮类化合物中的主要成分　．一Ｉ，其结构式如图１：　图１芦丁结构式　研究表明，中草药的药效与所含微量元素的种类和含量有着密切的关系，银杏类药物的药效除了　与黄酮相关外，还与其所含的微量元素有关，微量元素含量影响银杏的品质、药用食用效果。嘲本实验　通过对银杏叶、果皮及银杏仁中的铁（Ｆｅ）、锰（Ｍｎ）、铜（Ｃｕ）、锌（Ｚｎ）、砷（Ａｓ）、硒（ｓｅ）等６种微量元素及其黄　酮的含量进行了测定及分析，为阐明银杏类药物的药理及药效提供了有用的数据，也为银杏资源的进　收稿日期：２０１５—０８—２８　基金项目：西南大学基金项目“去甲斑蝥素衍生物的合成及其与牛血清蛋白的荧光作用机制研究”，项目编号：ＸＤＪＫ２０１４ＣＯ０５；　毕节学院基金项目“去甲斑蝥素氨基硫脲类化合物合成及活性研究”，项目编号：２０１１２００７；贵州工程应用技术学院　教改项目“化学专业模块化教学改革”，项目编号：ＪＧ２０１５００４。　作者简介：曾造（１９７８一），男，贵州金沙人，贵州工程应用技术学院化学工程学院副教授。研究方向：药物合成活性。　・１３８・　一步开发应用提供参考依据。　一、材料与方法　１．仪器及试剂　Ｆ一２７００型分子荧光光度计（日本日立）、ＴＡＳ一９９０原子吸收分光光度计（上海普析）、ＡＦＳ一８２２０原子　荧光光度计（上海普析）、１０１—１型电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴）、ＡＵＹ一２２０型分析天平（上海津岛国　际）、ＳＧ一３３００超声波清洗器（上海冠特）、ＰＨＳ一３Ｅ精密数字ＰＨ计（上海科仪）；芦丁对照品（国药试剂），　银杏叶、银杏果皮、果仁样品均于２０１４年秋季采自贵州工程应用技术学院校园内（银杏树生长６年），其　它试剂均为分析纯。　２．微量元素的检测方法　（１）样品前处理　银杏叶、银杏果皮、果仁经洗净、晾干，７０％烘干、粉碎后，各称取１．０ｏ　ｇ于２５０ｍＬ圆底烧瓶中，加入　１６　ｍＬ浓硝酸和４　ｍＬ高氯酸，超声２０　ａｒｉｎ，再置于电加热套上，控制最高消化温度为１５０￣Ｃ，保持微沸，　至棕黄色烟变为白色烟雾，消化液澄清透明。当消化液蒸至２—３　ｍＬ时，冷却至室温，加入４—５　ｍＬ蒸馏　水后继续加热至１—２　ｍＬ，冷却后过滤，备用。　（２）测定微量元素　将处理好的样品分别转移至５０　ｍＬ容量瓶中，１％ＨＮＯ，定容，摇匀，用原子吸收法绘制各元素标准　工作曲线，并测定各样品中的Ｆｅ、Ｍｎ、Ｃｕ、Ｚｎ元素含量。采用原子荧光法测定各样品的Ａｓ、ｓｅ元素含　量，即将处理好的样品分别转移至５０ｍＬ容量瓶中，加人浓盐酸２．５　ｍＬ，加入５％硫脲＋５％抗坏血酸混　合液１０　ｍＬ，蒸馏水定容，现配现用。　３．黄酮含量测定　（１）黄酮提取　分别称取黄银杏叶、绿银杏叶、银杏果皮、果仁粉末３．０ｏ　ｇ，用滤纸包好，放入索氏提取器中，根据液　料比为１：１５，量取４５　ｍＬ无水乙醇于１００　ｍＬ圆底烧瓶中，回流３　ｈ，抽滤，收集提取液，量取体积，留存备　用。另称取黄叶、绿叶、果皮、果仁粉末３．００　ｇ于２５０ｍＬ锥形瓶中，加人６０％乙醇４５　ｍＬ后超声，时间为　４５　ｍｉｎ，功率为１００　ｗ，重复２次，静置３　ｈ后抽滤，收集提取液并量取体积，留存备用。再称取黄叶、绿　叶、果皮、果仁粉末３．００　ｇ于２５０　ｍＬ锥形瓶中，加入６０％乙醇４５　ｍＬ后浸泡１０　ｈ，然后再超声１次，时间　为２５　ｍｉｎ，功率为１００　Ｗ，抽滤，收集提取液并量取体积，留存备用。　（２）黄酮含量测定　用移液管分别移取黄叶、绿叶提取液１　ｍＬ于１００　ｍＬ容量瓶，移取果皮提取液１　ｍＬ于５０　ｍＬ容量　瓶，６０％乙醇稀释定容；果仁不稀释。荧光仪器在激发波长ｈｅｘ＝４３６　ｎｍ，发射波长ｈｅｍ＝４８３　ｎｍ，激发光　谱通带５　ｎｍ，发射光谱通带为５　ｎｍ的条件下１７１，先测定芦丁标准溶液的吸光度（Ａ），绘制标准曲线。再　用移液管分别移取黄叶、绿叶、果皮、果仁提取液Ｏ．５、１．０、１．Ｏ、０．５　ｍＬ于１０　ｍＬ容量瓶中，加入５％的Ａｌ—　Ｃｌ，溶液３　ｍＬ，加入乙酸一乙酸钠缓冲溶液（ＰＨ＝４）１　ｍＬ，６０％乙醇定容，摇匀，依次测定样品溶液的吸光　度，计算出银杏样品中的黄酮含量。　二、结果与讨论　１．微量元素含量分析　根据标准曲线的线性回归方程及稀释倍数，可计算出各样品中微量元素的含量高低，其实验结果　见表１。　・１３９・　表１　银杏样品中６种微量元素的含量　《鹫　鍪　１　１　１　１　０　Ｏ　Ｏ　Ｏ　８　６　４　２　ｌ　８　６　４　２　０　由表１可知，银杏中所测６种微量元素总体含量高低依次为：Ｆｅ＞Ｚｎ＞Ｍｎ＞Ａｓ＞Ｃｕ＞Ｓｅ。将４种样品中　微量元素进行比较，黄银杏叶为：Ｆｅ＞Ｍｎ＞Ｚｎ＞Ａｓ＞Ｓｅ＞Ｃｕ；绿银杏叶为：Ｆｅ＞Ｚｎ＞Ｍｎ＞Ａｓ＞Ｃｕ＞Ｓｅ；银杏果皮　为：Ｆｅ＞Ｚｎ＞Ｍｎ＞Ａｓ＞Ｓｅ＞Ｃｕ；银杏仁为：Ｚｎ＞Ｍｎ＞Ｃｕ＞Ａｓ＞Ｓｅ。其中，银杏叶的微量元素较为丰富，含量相对　较高，而银杏果皮、仁中的微量元素相对较低。　２．黄酮含量分析　（１）标准曲线的绘制　根据芦丁标准样品的浓度对吸光度作图，绘制得三种提取方法的标准曲线如图２所示。从中可以　看出，所有的标准曲线都呈现了良好的线性关系，试验结果的可信度高。　芦丁标准曲线　峥索式提取　■超声提取　撬冷浸提取　２　４　６　８　玉０　１２　浓度ｃ　Ｑ￣／ｍｔ）　曲线回归方程　索式提取　超声提取　Ｉ＝Ｏ．１２３ｌｃ－Ｏ．０１６８　Ｉ＝Ｏ．１３０６ｃ＋０．１７７４　冷浸提取　Ｉ＝０．１５７３ｃ＋０．Ｏ０３０　图２芦丁标准曲线及相关系数　・１４０・　（２）实验结果　将银杏样品所测得的吸光度带人相应的标准工作曲线方程，可求得测出的样品浓度，即可计算出　各样品中实际的总黄酮含量，其结果见表２：　表２　三种提取方法测定样品中的黄酮含量　３．结果分析　采用索氏提取法提取黄酮的实验表明，银杏中各部位的含量为：黄叶：１８．３０％；绿叶：７．０３％；果皮：　４．Ｏ１％；果仁：０．１９％。超声波法提取黄酮的实验结果为：黄叶：１９．３７％；绿叶：７．１４％；果皮：２．７５％；果　仁：０．４６％。冷浸法提取黄酮的实验结果为：黄叶：２０．１２％；绿叶：８．５５％；果皮：３．３３％；果仁：０．９５％。　由表２可知，黄银杏叶中的黄酮含量最高，而银杏仁中的黄酮含量最低。同时，黄银杏叶和绿银杏　叶中的黄酮含量明显不同，表明植物在不同的生长阶段其黄酮含量是有所变化的。　三、结论　１．微量元素含量　通过对本批次银杏样品中微量元素的含量测定表明，Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ元素含量较高，其中以银杏叶中的　含量最高为（单位：　ｇ）：Ｆｅ　２９８．３５、Ｍｎ　２２．８５、ｚｎ　１５．４５，与秦公伟等嘲对陕西汉中一带同时期银杏叶的　测定结果（Ｆｅ　３６５．７、Ｍｎ　２４．３、Ｚｎ　１３．６）及李春鸣等［９１测定结果（Ｆｅ　３４０、Ｍｎ　２０、Ｚｎ　７０）相比较，说明不同区　域、不同产地的银杏叶中Ｆｅ、Ｍｎ含量影响不大，ｚｎ含量偏低，可能与样品产地不同有关。ｓｅ含量均小　于０．３　／ｇ，Ｃｕ含量均小于２０．０　ｇ，符合药用植物与制剂进出口绿色标准”　。而砷的含量以黄银杏叶　最高，砷摄人过量对人体会造成一定的危害，故在进行治疗心脑血管疾病的药物研究时，需要计算出药　片的各元素含量，以便合理安全用药。　２．黄酮提取方法比较　通过三种方法测定的黄酮含量比较，可知，由冷浸法提取的黄酮含量总体较高。以黄银杏叶为例，　冷浸法的２０．１２％＞超声波提取法的１９．３７％＞索氏提取法的１８．３０％；绿银杏叶、银杏果皮、银杏仁样品也　类似。冷浸法不仅方便快捷，成本低，无污染，提取率高，故实验的进一步探究中可选择冷浸法提取工　艺进行黄酮的提取。　３．黄酮含量分析　通过三种常见提取方法提取黄酮并采用荧光分光光度计测定含量，均可表明，银杏中各部位的含　黄酮量高低为（以冷浸法为例）：黄银杏叶２０．１２％＞绿银杏叶８．５５％＞银杏果皮３．３３％＞银杏果仁　０．９５％。故实验的进一步探索中，可根据黄酮含量高低及各微量元素含量高低，合理选择样品。　参考文献：　［１】李敬芬，李彬，佟德成，等．均匀试验设计在６一甲基一８一氰甲基一２，３，４一三甲氧基黄酮合成中的应用　［『】．数学医学药杂志，２０１３（１）：６７—６８．　・１４１・　［２ｌ￣）Ｋｇａ，凌娅，唐于平，等．银杏萜内酯的分离纯化和结构鉴定【『】．中国天然物，２００４（１）：１１—１５・　【３】万明，宋永刚，杨菠．黄酮类化合物的药理作用及其在食品工业中的应用Ⅱ］．江西食品工业，２００７（３）　４６－４９．　【４］肖崇厚冲药化学【Ｍ】．上海：上海科学技术出版社，１９９４：５６—７５．　【５］尉芹，马希汉世仲叶化学成分研究Ⅱ】．西北林学院学报，１９９５（４）：８８—９３．　［６】胡秀良．银杏的利用价值与药用栽培［『】冲国农村小康科技，２００２（１０）：９—１１．　【７】刘君，李振泉，全先高，等．荧光法测定不同采收期银杏叶中的总黄酮【『】．数理医药学杂志，２０１２（１）：　９４－９５．　【８】秦公伟，耿敬章，曹小勇，等．银杏叶片中微量元素的火焰原子吸收法分析Ｕ】．北方园艺，２０１２（２）：　３５－３７．　【９】李春呜，谢志娟，轰凯华，等．银杏叶片中无机元素季节性含量的测定Ⅱ］．西北民族大学学报，２００４　（２）：３１—３２．　［１　０］国家药典委员会．中华人民共和国药典【Ｍ】．北京：化学工业出舨社，２０１０：２９６—２９７．　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒａｃｅ　Ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｇｉｎｋｇｏ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ＺＥＮＧ　Ｚａｏ，ＷＥＮ　Ｚｈｕ，ＯＵ　Ｙａｎｇ－Ｆｅｉ　（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　Ｂｉｊｉｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５　１７００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｔｒａｃｅ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｉｎ　Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ　ｌｅａｖｅｓ，ｐｅｅｌ　ａｎｄ　ｎｕｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｖｉａ　ａｔｏｍｉｃ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｔｏｍｉｃ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄ—　ｉｅｄ　ｖｉａ　Ｓｏｘｈｌｅｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｌｄ　ｓｏａｋ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｏｖｅｒ　Ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ．Ｉｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｒａｃｅ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｉｎ　ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｔｓ　ｐｅｅｌ　ａｎｄ　ｎｕｔｓ．　Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｔｏｔｌ　ａｌａｖｏｎｏｉｆｄ　ｉｎ　Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ　ｗａｓ　ｙｅｌｌｏｗ　Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ　ｌｅａｖｅｓ，ｇｒｅｅｎ　ｌｅａｖｅｓ，ｐｅｅｌ　ａｎｄ　ｎｕｔｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｉｎｋｇｏ　Ｂｉｌｏｂａ；Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｔｒａｃｅ　Ｅｌｅｍｅｎｔｓ；Ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ；Ａｔｏｍｉｃ　Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　Ｓｐｅｃ－　ｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　（责编：郎禹责编：明茂修）　・１４２・