猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究进展

猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究进展　田　野　吴　琼　胡瑛瑛　李尊江　（哈药集团生物疫苗有限公司，　黑龙江省哈尔滨市１５００００）　猪繁殖与呼吸综合征ｆｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅ—　接种猪的中和抗体滴度和分泌ＩＦＮ一　外，其返强性也是人们担心的一个重要　ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，　ＰＲＲＳ），又称“蓝耳病”，是上世纪８０　年代中后期出现的一种新的传染性疾　病，由猪繁殖与呼吸综合征病毒　（ＰＲＲＳＶ）引起，以怀孕母猪发生流产、　早产、死胎、木乃伊胎等为主要临床特　征的严重繁殖障碍疾病：患该病的仔猪　出现呼吸道症状．严重的甚至出现死　亡；患ＰＲＲＳ育肥猪主要出现呼吸道症　状。该病自１９８７年首先在美国被发现　以来．各国相继流行，给世界养猪业造　成了严重经济损失，因此国际兽疫局将　其列为Ｂ类传染病，我国将其列为二　类传染病。ＰＲＲＳＶ的持续性感染和免　疫抑制作用给养猪生产中的疾病防控带　来了很大的困难：另外，ＰＲＲＳＶ还可　逃避免疫系统的监视，可持续感染和造　成长时间的病毒血症，且抗原变异较　快，这又给免疫预防ＰＲＲＳ带来了困　难。ＰＲＲＳ同其他病毒性疾病一样，目　前尚没有有效的治疗药物，控制该疾病　的主要方法仍是以传统的免疫预防接种　为主。本文就ＰＲＲＳ疫苗的研究进展做　一综述以供大家参考。　１灭活疫苗　ＰＲＲＳ灭活疫苗具有安全、不存在　散布病毒和造成ＰＲＲＳ新疫源的危险，　不能返祖返强，便于贮存和运输、对母　源抗体的干扰作用不敏感等优点，因此　被作为预防和控制ＰＲＲＳ的首选疫苗。　在国外，Ｃｙｂｌｕｅ等研制了灭活疫苗，免　疫母猪可提高繁殖力，降低死胎率。　Ｎｉｌｕｂｏｌ　Ｄ等用灭活疫苗接种感染　ＰＲＲＳＶ的猪只，并对接种猪的中和抗　体和分泌　干扰素的细胞进行了检测，　的细胞都有明显的升高。在我国，仇华　吉等用分离的ＰＲＲＳＶ　ＣＨ—ｌａ株制成油　佐剂灭活疫苗，接种猪后２０天左有，　抗体达到高峰，并可持续６个月左右，　攻毒后免疫组产仔率明显高于非免疫对　照组产仔率。但是灭活疫苗免疫剂量　大、免疫次数多、产生免疫时间较长，　不适合仔猪免疫。同时灭活疫苗不能将　内源性蛋白抗原递呈给免疫系统．无法　诱生Ｔ细胞免疫反应，且产生的保护力　多不适应ＰＲＲＳＶ很强的变异性．对异　源毒株免疫防控效果不理想。由于灭活　疫苗主要引起体液免疫．而ＰＲＲＳＶ具　有抗体依赖性增强（ＡＤＥ）作用，因此　在ＰＲＲＳ防治上受到一定的限制。　２弱毒疫苗　ＰＲＲＳ弱毒疫苗具有免疫效果好、　免疫力较坚强、免疫期长等优点，而且　弱毒苗还可以用来对母猪免疫接种而使　仔猪获得被动免疫。Ｍｅｎｇｅｌｉｎｇ等报道　了一种弱毒疫苗一次肌肉注射虽然在接　种后可产生病毒血症．但对怀孕后期的　母猪还是安全的。虽然疫苗毒株也能穿　过胎盘，在子宫内使胎儿感染，但对胎　儿没有或只有轻微的影响。Ｍｅｎｇｅｌｉｎｇ　等用不同的强、弱毒株进行免疫及攻毒　试验．结果只有异源攻毒组分离到病　毒，表明ＰＲＲＳ弱毒疫苗免疫反应的株　特异性。接种弱毒疫苗后可造成病毒经　胎盘感染胎儿等现象，会对繁殖性能造　成不利影响：弱毒疫苗可使精液带毒和　精液质量下降；弱毒疫苗还可能造成疫　苗毒的传播．引起ＰＲＲＳＶ的持续感染　和病毒血症，有些猪群出现急性ＰＲＲＳ　样症状。弱毒疫苗除了存在散毒的危险　问题。由于ＰＲＲＳ强毒和弱毒在猪体内　的免疫反应是一致的，所以长期使用　ＰＲＲＳ弱毒疫苗带来的安全问题仍是目　前ＰＲＲＳ免疫中最大的争议。　３　ＰＲＲＳ亚单位疫苗　大肠杆菌表达系统是基因表达技术　中发展最早的．具有遗传背景清楚．目　标基因表达水平高，培养周期短，抗污　染能力强等特点。但是大肠杆菌中的目　标基因往往会形成不溶的、无活性的包　涵体，使大肠杆菌表达系统的应用受到　限制。Ｄｅａ报道用大肠杆菌表达融合的　ＧＳＴ—ＧＰ５蛋白免疫猪不能诱导免疫系　统产生中和抗体。这可能是因为ＧＰ５　蛋白上的中和表位是构象依赖性的，而　在原核表达系统表达的蛋白无法有效的　进行多肽链的折叠、二硫键的形成和翻　译后的修饰，因此不能模拟病毒蛋白的　天然结构　杆状病毒表达系统和酵母表达系统　是目前用于亚单位疫苗研究最多的两种　表达系统，这两种表达系统可以使表达　的蛋白进行正确折叠．二硫键形成和翻　译后修饰。杆状病毒具有杆状衣壳和较　大的双股ＤＮＡ基因组．它可以感染节　肢动物，特别是昆虫，并在昆虫细胞内　高效瞬时表达。酵母是一种单细胞真核　生物，有完整的亚细胞结构和严密的基　因表达调控机制。作为一种微生物，它　具有生长繁殖迅速、营养要求简单和便　于丁业化大规模发酵培养的优点。亚单　位疫苗安全，不存在潜伏感染的危险，　但由于它不能在体内复制，因此所需的　量较大，成本也较高，限制了亚单位疫　苗的广泛应用。　Ｃｈｉｎａ　Ｓｗｉｎｅ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　２１　２０１１年第８期　４　ＰＲＲＳ活病毒载体疫苗　活病毒载体疫苗就是利用基因操作　毒血症。Ｊｉａｎｇ等用伪狂犬病毒共表达　了ＰＲＲＳＶ的ＧＰ５、Ｍ蛋向以及修饰的　ＧＰ５和Ｍ蛋白ｆＧＰ５一Ｍ，Ａ、Ｂ表位之　间插入一个辅助Ｔ细胞表位）。免疫小　鼠后可以诱导针对ＰＲＲＳＶ特异的体液　仅＇口丁诱导体液免疫，也可诱导细胞免　疫。　Ｐｉｒｚａｄｅｈ等的试验结果表明．ＧＰ５　真核表达质粒肌肉注射免疫小鼠和绪　技术将异源病毒的保护抗原基因及启动　子涮控序列插入到减毒的病毒载体基因　组的某些部位，如插入到弱毒疫苗株的　后，能够诱导产生病毒特异性中和抗　体，并且中和抗体的产生比自然感染提　前了１个月。结果表明，基因疫苗免疫　仔猪后，都能诱导产生病毒特异性抗　体，与自然感染对照组和空白对照组柏　比，差异都极显著。Ｋｗａｎｇ等克隆了　ＰＲＲＳＶ　ＯＲＥ４、ＯＲＦ５、ＯＲＦ６和ＯＲＦ７　基凶组非必需区中而构建的疫苗，使之　高效表达，从而使免疫动物产生抗体和　细胞免疫应答，使机体获得对插人基因　相关疾病的抵抗力。目前以活病毒为载　体构建的活病毒载体疫苗是ＰＲＲＳ新型　疫苗研究的一个重要方向。由于异源病　免疫应答，完全保护小鼠免受致死剂量　病毒的攻击，而后者ｆＧＰ５一Ｍ）免疫后　诱导了针对ＰＲＲＳＶ更高水平的中和抗　体和淋巴细胞增殖。　国内的李玉峰等人将ＰＲＲＳＶ的　ＧＰ５基因插入到人５型腺病毒载体中．　从而获得了能够表达ＧＰ５基因的重组　毒目的基　已成为载体病毒基因组的一　部分，可随着载体病毒繁殖而不停的表　基因，分别插入ｐｃＤＮＡ３．１（＋），制得　腺病毒，通过免疫试验证明所构建的重　组腺病毒能够刺激猪产生中和抗体。　种ＤＮＡ疫苗，并用于动物试验。每种　质粒免疫　头猪，ＥＬＩＳＡ试验结果表　明，第　次免疫后，ｐｃＤＮＡ３．１（＋）一ＯＲＦ７　达，因而这种疫苗在机体可同时诱导产　生针对载体病毒基因异源性病毒的特异　性免疫反应。活病毒载体疫苗与弱毒疫　苗相似，能诱导强而持久的免疫反应．　而且由于作为载体的活病毒已经过改　５　ＰＲＲＳ核酸疫苗　核酸疫苗又称ＤＮＡ疫苗或基因疫　苗．是利用基因重组技术直接将编码抗　免疫组３头猪都产生ＰＲＲＳＶ特异性抗　体，ｐｃＤＮＡ３．１　ｆ＋）一ＯＲＦ６免疫组伍第　四次免疫后，只有～失猪产生抗体．而　造，其安全性较传统常规弱毒苗大为提　高。　原蛋白的外源基因插入真核表达载体　中．直接接种到动物体内，并在体内表　达．可以使动物机体产生并感染具有相　同构象和翻译后加Ｔ的蛋白，实现外源　性蛋白的内源性表达，从而诱导宿主产　ｐｃＤＮＡ３．１（＋）—０ＲＦ４和ｐｃＤＮＡ３．１（＋）－ＯＲＦ５　免疫组都没有产生抗体。检测ＩＦＮ一＾ｙ及　淋巴细胞增殖试验表明．二免以后所有　组都产生了细胞免疫，但ｐｃＤＮＡ３．１（＋卜　ＯＲＦ５细胞免疫水平明显高于其它组　首例ＰＲＲＳ活病毒载体疫苗是利用　传染性胃肠炎病毒ｆＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ　ｇａｓ—　ｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ　ｖｉｕｒｓ，ＴＧＥＶ）辅助表达系　统，构建表达ＧＰ５的重组ＴＧＥＶ，采用　滴鼻、ｒ＿＿１服和胃肠道　种途径联合免疫　７日龄仔猪，共免疫　次ｆ每次免疫间　隔７天１，末次免疫７天后采血．ＥＬＩＳＡ　可检测到很高的ＧＰ５特异性抗体．但　该试验末检测中和抗体、未进行攻毒试　验　生对该抗原蛋白的保护性免疫应答．起　Ｊｉａｎｇ等将ＰＲＲＳＶ的ＧＰ５和Ｍ蛋Ｆ１基　因共表达，发现共表达后可以形成二聚　到预防该疾病的目的。与传统疫苗相　比．核酸疫苗具有很大的优势：能诱导　机体产生全面的免疫应答．其保护性免　疫应答对不同类型的病原体具有交叉抵　体并改变ＧＰ５蛋白的细胞内定位　免　疫小鼠和猪后可以产生比单独表达更高　的中和抗体和淋巴细胞增殖。由此呵　见，ＰＲＲＳ的ＤＮＡ疫苗可以产生体液和　御作用；弱毒、灭活疫苗均有一定致病　作用，而ＤＮＡ疫苗具有安全可靠的特　细胞免疫应答。　尽管目前针对ＰＲＲＳ的疫苗研究的　种类繁多，但没有…种疫苗可对猪产生　仇华吉等用伪狂犬病毒ｆＰＲＶ１　Ｂａｒｔｈａ—Ｋ６１株表达ＰＲＲＳＶ的ＧＰ５蛋　点：ＤＮＡ疫苗在体内能够表达经修饰　的天然抗原，具有与天然抗原相同的构　白，尽管免疫后没有检测到针对　ＰＲＲＳＶ的抗体，但攻毒后只引起短期　的发热、轻微的肺和肾损伤、短期的病　象：核酸疫苗接种后，ＤＮＡ疫苗编码　的蛋白质能持续表达较长时间，体内Ｂ　细胞和Ｔ细胞的免疫记忆不断加强，不　完全的保护作用，开发安全有效的　ＰＲＲＳ新型疫苗仍是今后努力的方向　韩国增加冰鲜五花肉进口量　本刊辑：据中国猪业网２０１１年８月１９日报道，国外农业服务局（ＵＳＤＡ）的一份报告称，韩国２０１１年７月国产　五花肉平均价格为２。３７３万韩：￣／ｋｇ，比去年口蹄疫暴发前上涨了４３％。　对此，韩国财政部Ｅ经增加了２６万吨五　花肉和其它猪肉分割制品的进日配额。随着当前配额的增加，进口五花肉目前售价为冒产五花肉的一半，新鲜五花肉　为１．１５　Ｚｆ￣＆ｇ，冷冻五花肉为８　５ｏｏ韩￣／ｋｇｏ然而零售价仍保持在历史高点。另外加上关税削减，韩国农林渔业食　品部７月１９日宣布了快速启动进日新鲜和冰鲜五花肉的支持措施。　２２　Ｃｈｉｎａ　Ｓｗｉｎｅ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ