*CN101721612A*
(10)申请公布号 CN 101721612 A(43)申请公布日 2010.06.09
(12)发明专利申请
(21)申请号 200810202042.8(22)申请日 2008.10.31
(71)申请人上海润知生物科技有限公司
地址201802 上海市沪宜公路1255号(72)发明人徐振晔
(74)专利代理机构上海智信专利代理有限公司
31002
代理人薛琦 朱水平(51)Int.Cl.
A61K 36/8969(2006.01)A61P 7/00(2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 13 页
(54)发明名称
一种升高白细胞的中药组合物及其制备方法和应用(57)摘要
本发明公开了一种升高白细胞的中药组合物，其主要由下述原料药按重量配比制得：黄芪6-60份、黄精6-60份、天花粉6-60份和淫羊藿3-30份。本发明还公开了本发明的中药组合物的制备方法以及其在制备治疗白细胞减少症；提高机体免疫功能；促进骨髓造血干/祖细胞增殖、保护造血微环境；修复放射线对骨髓造血组织的损坏和损伤；防治放化疗的骨髓抑制；促进粒-单系造血祖细胞集落形成；改善和提高癌症患者中医症候和生活质量；或促进气阴两虚患者的恢复的药物中的应用。CN 101721612 ACN 101721612 A
权 利 要 求 书
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1.一种可升高白细胞的中药组合物，其特征在于：其主要是由下述重量配比的原料中药材制得：黄芪6-60份、黄精6-60份、天花粉6-60份和淫羊藿3-30份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述的重量配比的原料中药材中还包括女贞子3-30份和骨碎补6-60份。
3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物主要是由下列重量配比的原料中药材制得：黄芪10-40份，黄精10-40份，天花粉10-40份，女贞子5-20份，骨碎补10-40份和淫羊藿5-20份。
4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物主要是由下列重量配比的原料中药材制得：黄芪30份，黄精30份，天花粉30份，淫羊藿15份，女贞子15份和骨碎补30份。
5.如权利要求1～4中任一项所述的中药组合物，其特征在于：所述的中药组合物的剂型为口服液体制剂、颗粒剂、滴丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、脂质体、缓释制剂、控释制剂或注射剂。
6.一种如权利要求1～4中任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于选自下述三种方法中的任一种：
方法一：
(1)按照所述的重量配比称取原料中药材；(2)将上述原料中药材干燥粉碎成细粉，得活性成分细粉；方法二：
(1)按照所述的重量配比称取原料中药材；(2)将黄芪、黄精和淫羊藿加水煎煮，过滤，取滤液，离心分离去除固体物质，取上清液浓缩成清膏，在将其余原料中药材干燥粉碎成粉，与上述清膏混合均匀，得活性成分清膏；
方法三：
(1)按照所述的重量配比称取原料中药材；(2)将上述原料中药材加水煎煮，过滤，取滤液，离心分离去除固体物质，取上清液浓缩成清膏，得活性成分清膏。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：方法二或三中，所述的加水煎煮的步骤中，每次加水的量为生药重量的8-16倍，煎煮的温度为煎煮液沸腾的温度，煎煮的时间为2-4小时，煎煮的次数为1-4次；所述的取上清液浓缩成清膏的步骤中，清膏的相对密度为0.8～1.5。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：将所述的方法一制得的活性成分细粉，或所述的方法二或三制得的活性成分清膏，或由该清膏干燥，粉碎制成的活性成分细粉，与赋型剂按本领域常规方法制成常规剂型。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述的常规剂型为口服液体制剂、颗粒剂、滴丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、脂质体、缓释制剂、控释制剂或注射剂。
10.如权利要求1～4中任一项所述的中药组合物在制备治疗白细胞减少症；提高机体免疫功能；促进骨髓造血干/祖细胞增殖、保护造血微环境；修复放射线对骨髓造血组织的损坏和损伤；防治放化疗的骨髓抑制；促进粒-单系造血祖细胞集落形成；改善和提高癌症患者中医症候和生活质量；或促进气阴两虚患者的恢复的药物中的应用。
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CN 101721612 A
说 明 书
一种升高白细胞的中药组合物及其制备方法和应用
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技术领域
[0001]
本发明涉及一种升高白细胞的中药组合物及其制备方法和应用，属于中药领域。
背景技术
肿瘤放化疗最常见的毒副反应是骨髓抑制，主要表现为造血干细胞的增殖抑制。
由于白细胞的寿命较短，临床表现常见白细胞减少。骨髓抑制限制了放化疗的连贯性，从而影响放化疗疗效。近年来国内外研制和开发造血细胞因子，如G-CSF、GM-CSF，在化疗中发挥较好的辅助作用。但这些造血因子价格昂贵，有反跳现象，可引起骨痛、发热等副反应。中药对防治放化疗骨髓抑制有一定疗效，但多数用于初治或骨髓抑制程度比较轻的患者。
[0002]
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种可升高白细胞，有效促进造血功能恢复的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的成药通过促进脾细胞表达GM-CSF蛋白，增加内源性GM-CSF生成，升高GM-CSF活性，进而促进白细胞和骨髓细胞的分化增殖，可升高放化疗患者的白细胞，防治放化疗患者的骨髓抑制，改善和提高癌症患者中医症候和生活质量；对于气虚患者，通过益气养阴，提高免疫力促进气虚患者的恢复；且无毒副反应。
[0004] 本发明的中药组合物主要是由下述重量配比的原料中药材制得：黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge)6-60份、黄精(Polygonatumsibiricum Red.)6-60份、天花粉(Trichosanthes kirilowii Maxim.)6-60份和淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)3-30份。[0005] 较佳的，所述的原料中药材中还包括女贞子(Ligustrum lucidum Ait.)3-30份和骨碎补(Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.)6-60份。
[0006] 本发明的中药组合物更佳的主要是由下列重量份的原料中药材制得：黄芪10-40份，黄精10-40份，天花粉10-40份，女贞子5-20份，骨碎补10-40份和淫羊藿5-20份制备而成。
[0007] 最佳的，主要是由下列重量份的原料药制得：黄芪30份，黄精30份，天花粉30份，淫羊藿15份，女贞子15份和骨碎补30份。
[0008] 本发明的中药组合物可采用中药制剂的常规方法制成任何常规制剂，较佳的为口服液体制剂、颗粒剂、滴丸剂、散剂、片剂、胶囊剂(包括硬胶囊和软胶囊)、脂质体、缓释制剂、控释制剂或注射剂(包括小针、输液和冻干粉)，更佳的为口服液体制剂、颗粒剂、滴丸剂、片剂、胶囊剂或注射剂。
[0009] 本发明还进一步涉及本发明的药物组合物的制备工艺：可以将上述原料直接干燥粉碎或经本领域常规提取技术提取精制得到可升高白细胞、提高免疫力的药物活性成分。较佳的三种制备方法为：[0010] 方法一：按照所述的重量配比称取原料中药材；将上述中药材干燥粉碎成细粉，得活性成分细粉。
[0003]
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CN 101721612 A[0011]
说 明 书
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方法二：按照所述的重量配比称取原料中药材；将黄芪、黄精和淫羊藿加水煎煮，
过滤，取滤液，离心分离去除固体物质，取上清液浓缩成清膏，在将其余原料药材干燥粉碎成粉，与上述清膏混合均匀，得活性成分清膏。[0012] 方法三：按照所述的重量配比称取原料中药材；加水煎煮，过滤，取滤液，离心分离去除固体物质，取上清液浓缩成清膏，即得活性成分清膏。[0013] 上述方法二或三中，加水煎煮的步骤中，每次加水的量较佳的为生药重量的8-16倍，煎煮的温度较佳的为煎煮液沸腾的温度，煎煮的时间较佳的为2-4小时，煎煮的次数较佳的为1-4次。煎煮次数为2次以上时，每次煎煮后过滤，合并滤液，之后再进行离心分离去除固体物质，取上清液浓缩成清膏。所述的清膏的相对密度较佳的为0.8～1.5(温度在60℃以下)。
[0014] 进一步的，将方法一制得的活性成分细粉，或方法二或三制得的活性成分清膏，或由该清膏干燥，粉碎制成的活性成分细粉，与赋型剂按本领域常规方法制成各种药学剂型，如散剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、片剂或注射剂等。其中，所述的赋型剂根据不同的剂型，按本领域常规知识选择。
[0015] 本发明的中药组合物的口服液体制剂的制备方法可为：向前述方法制得的活性成分清膏中再加入甜味素和山梨酸钾，用量可为常规量，加入常规用量的水，搅拌，调pH值至弱酸性，较佳的为pH6-7，可采用NaOH水溶液进行调节，之后过滤，灌装，灭菌，即得。本剂型的优点是：起效迅速，生物利用度高。
[0016] 本发明的中药组合物的颗粒制剂的制备方法可为：向前述方法制得的活性成分清膏中再加入糊精和甜味剂，糊精的用量较佳的为清膏质量的等量，甜味剂的用量可为常规量，一般为质量百分比10％以下；再经过干燥、制粒、整粒，即得颗粒剂。[0017] 本发明的中药组合物的胶囊剂的制备方法可为：向前述方法制得的活性成分清膏中再加入常规量的淀粉混匀，制粒，过筛，干燥，整粒，灌装，即得胶囊剂。[0018] 本发明的中药组合物的片剂的制备方法可为：将前述方法制得的活性成分清膏干燥，粉碎，制粒，压制成片；或者将前述方法制得的活性成分细粉制粒，压制成片。[0019] 本发明所用试剂及原料均市售可得。
[0020] 本发明的中药组合物尤其适用治疗白细胞减少症；提高机体免疫功能；促进骨髓造血干/祖细胞增殖、保护造血微环境；修复放射线对骨髓造血组织的损坏和损伤；防治放化疗的骨髓抑制；促进粒-单系造血祖细胞集落形成；改善和提高癌症患者中医症候和生活质量；还适用促进气阴两虚患者的恢复。
[0021] 本发明的中药组合物的治疗剂量可为：成人每日服用量相当于0.06-1.5克生药/kg体重。本发明中，所述的“生药”是指中药材原料的质量。[0022] 本发明的积极进步效果在于：本发明的中药组合物经临床及动物试验研究发现：本发明的中药组合物能够升高癌症患者白细胞，防治癌症患者较重的骨髓抑制，改善和提高癌症患者中医症候和生活质量。
具体实施方式
[0023] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
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CN 101721612 A[0024]
说 明 书
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实施例1口服液体制剂的制备
[0025] 1、称取原料中药材：黄芪6kg，黄精6kg，天花粉6kg，骨碎补6kg，女贞子3kg，淫羊藿3kg。[0026] 2、将上述药材加15倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一次，过滤，合并两次的滤液，离心分离去除固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度0.8，温度59℃)。[0027] 3、加入1kg甜味素，2kg山梨酸钾，搅拌加水30L，10wt％NaOH水溶液调pH值至6-7，滤过，灌装，灭菌。
[0028] 实施例2颗粒剂的制备[0029] 1、称取原料中药材：黄芪30kg，黄精30kg，天花粉30kg，骨碎补30kg，女贞子15kg，淫羊藿15kg。[0030] 2、将上述药材加14倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一次，过滤，合并两次的滤液，离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.2，温度59℃)。[0031] 3、加入与清膏等质量的糊精和质量百分比5％的甜味剂，再经过干燥、制粒、整粒。[0032] 实施例3胶囊制剂的制备[0033] 1、称取原料中药材：黄芪60kg，黄精60kg，天花粉60kg，骨碎补60kg，女贞子30kg，淫羊藿30kg。[0034] 2、将上述药材加15倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一次，过滤，合并两次的滤液，离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.5，温度40℃)。[0035] 3、加入8kg淀粉混匀，制粒，过筛，干燥，整粒，灌装。[0036] 实施例4片剂的制备[0037] 1、称取原料中药材：黄芪10kg，黄精10kg，天花粉10kg，骨碎补10kg，女贞子5kg，淫羊藿5kg。[0038] 2、将上述药材加15倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一次，过滤，合并两次的滤液，离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.1，温度59℃)。[0039] 3、干燥，粉碎，制粒，压制成片。实施例5片剂的制备[0041] 1、称取原料中药材：黄芪40kg，黄精40kg，天花粉40kg，骨碎补40kg，女贞子20kg，淫羊藿20kg。[0042] 2、将上述药材加15倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一次，过滤，合并两次的滤液。离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.1，温度50℃)。[0043] 3、干燥，粉碎，制粒，压制成片。[0044] 实施例6片剂的制备[0045] 1、称取原料中药材：黄芪12kg，黄精12kg，天花粉12kg，骨碎补12kg，女贞子6kg，淫羊藿6kg。
[0040]
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CN 101721612 A[0046]
说 明 书
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2、将上述药材加15倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一
次，过滤，合并两次的滤液。离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.2，温度50℃)。[0047] 3、干燥，粉碎，制粒，压制成片。[0048] 实施例7活性成分清膏的制备[0049] 1、称取原料中药材：黄芪6kg，黄精6kg，天花粉6kg，淫羊藿3kg。[0050] 2、将黄芪、黄精和淫羊藿加15倍质量的水煎煮，时间3小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮一次，过滤，合并两次的滤液，离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度0.8，温度50℃)。将天花粉干燥粉碎成粉，与上述清膏混合均匀，得活性成分清膏。[0051] 实施例8活性成分清膏的制备[0052] 1、称取原料中药材：。黄芪60kg，黄精60kg，天花粉60kg，淫羊藿30kg。[0053] 2、将上述药材加8倍质量的水煎煮，时间2小时，过滤，将滤渣加水重复煎煮3次，过滤，合并两次的滤液。离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.2，温度50℃)。
[0054] 实施例9片剂的制备[0055] 1、称取原料中药材：。黄芪20kg，黄精20kg，天花粉20kg，淫羊藿10kg。[0056] 2、将上述药材加16倍质量的水煎煮，时间4小时，过滤，将滤液离心分离去固体物质，取上清液浓缩制得清膏(相对密度1.4，温度59℃)。[0057] 3、干燥，粉碎，制粒，压制成片。
[0058] 实施例10～41活性成分细粉的制备[0059] 按表1的配方称取原料中药材；将上述中药材干燥粉碎成细粉，得实施例10～41的活性成分细粉。
[0060]
黄芪
实施例
(kg)
10111213141516
6606606606
黄精(kg)6066066606
天花粉淫羊藿女贞子骨碎补(kg)6066606066
(kg)30333033030
(kg)\\\\\\\\\\\\\\
(kg)\\\\\\\\\\\\\\
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CN 101721612 A
说 明 书
黄芪
实施例
(kg)
(kg)
(kg)
(kg)
(kg)
(kg)
黄精
天花粉淫羊藿女贞子骨碎补
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171819202122232425262728293031323334353637
606606606606606066601040104010401040
606066066606606066604010401010401040
606066606066606066604010104040101040
7
3303330330303303330205520520205
\\303330330330330330205520520520
\\6066606606606066064010104010401040
CN 101721612 A
说 明 书
黄芪
实施例
(kg)
38394041
40104010
(kg)40104010
(kg)40104010
(kg)205205
(kg)520205
(kg)40101040
黄精
天花粉淫羊藿女贞子骨碎补
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[0061]
效果实施例1
[0063] 一、临床资料：
[0064] 1.1病例收集标准：凡经X线、CT、细胞学、病理学等确诊为肺癌及乳腺癌、胃癌、肠癌，中医辨证为气阴(血)两虚、气虚；年龄≥18岁，性别不限；Karnofsky氏评分标准在50分以上，预计可完成全程治疗并同意接受化疗的患者。排除1)化疗期间应用其它升白药物者；2)合并严重心、肝、肾、血液系统计病患者；3)感染患者及妊娠患者；4)有药物及食物过敏史者。
[0065] 1.2病例选择：观察112例恶性肿瘤患者，95.5％为复治患者。采用拆信封的方法随机分为4组。本发明的中药组合物治疗组分为治疗1组和治疗2组，对照组也分为对照1组和对照2组。[0066] 治疗1组：28例患者，男19例，女9例。年龄41～77岁。其中肺癌20例，其他癌8例。
[0067] 治疗2组：27例患者，男17例，女10例。年龄42～75岁。其中肺癌24例，其他癌3例。
[0068] 对照1组：33例患者，男21例，女12例。年龄37～77岁。其中肺癌23例，其他癌10例。
[0069] 对照2组：24例患者，男13例，女11例。年龄38～76岁。其中肺癌20例，其他癌4例。
[0070] 两组患者平均化疗疗程，治疗组为2.54个疗程，对照组2.86个疗程。两组资料性别、年龄、病种、化疗疗程无统计学差异，具有可比性。[0071] 2、治疗方法
[0072] 化疗方案随病种和病理分型而不同，均为有效，且对骨髓抑制作用明显的化疗方案。非小细胞肺癌用MVP方案；胃癌采用L-MFP方案；乳腺癌用NV方案；肠癌同胃癌方案。[0073] 治疗1组：化疗的同时服用采用实施例2的方法制得的颗粒剂，日服2次，每次2袋(0.4～0.8g生药/kg体重/次)2～3周1个疗程。[0074] 治疗2组：化疗后WBC＜4.0×109/L开始服用实施例2方法制得的颗粒剂，每日2次，每次2袋(0.4～0.8g生药/kg体重/次)，2周一疗程。[0075] 对照1组：化疗的同时服用茜草双酯，每次4片，每日3次，2～3周1个疗程。
[0062]
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说 明 书
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对照2组：化疗后WBC＜4.0×109/L开始服用茜草双酯，每次4片，每日3次，2周
一疗程。
观察期间不得输血，不能用其他任何对白细胞有影响的药物。
[0078] 3、观察项目：临床升白疗效，临床症候、症状改善情况，外周血白细胞计数，治疗前后尿、粪常规检查，X线，心电图、肝功能、肾功能、并进行肝脾超声波检查。
[0077]
4、疗效标准
[0080] 4.1中医疗效标准：[0081] 中医症状分级：按无、轻、中、重分别用(-)、(+)、(++)、(+++)表示。[0082] 评分方法：无(-)为0分；轻(+)为1分；中(++)为2分；重(+++)为3分。[0083] 疗效标准：治疗后临床症候积分值下降≥2/3为明显改善；治疗后临床症候积分值下降≥1/3，但＜2/3为部分改善；治疗后临床症候积分值下降＜1/3为无改善。[0084] 4.2西医疗效标准 根据国家卫生部制订的《药物临床研究指导原则》中升高白细胞(WBC)疗效标准：[0085] 显效：WBC总数＞4.0×109/L，并在疗程中能维持疗效直至停药1周，临床症状显著减轻或消失；[0086] 有效：WBC总数＜4.0×109/L，但比治疗前上升(0.5～1.0×109/L)并在疗程中能维持疗效直至停药1周，临床症状好转；[0087] 无效：WBC总数增高＜0.5×109/L，临床症状无好转。[0088] 二、研究结果[0089] 1.1中医疗效
[0090] 治疗前后治疗组与对照组症候变化情况：[0091] 治疗组：明显改善25例，部分改善19例，无改善11例，总有效率80％；[0092] 对照组：明显改善10例，部分改善19例，无改善28例，总有效率50.88％；[0093] 治疗组与对照组在改善症候方面有显著差异。[0094] 2.1西医疗效[0095] 治疗1组：显效17例，有效4例，无效7例，总有效率75.00％；[0096] 治疗2组：显效9例，有效15例，无效3例，总有效率88.89％；[0097] 对照1组：显效9例，有效9例，无效15例，总有效率54.55％；[0098] 对照2组：显效1例，有效13例，无效10例，总有效率58.33％；
[0079]
治疗1组与对照1组比较，治疗2组与对照2组比较，差异均有显著性。[0100] 1.2两组患者治疗前后WBC变化情况：见表2。治疗后3周WBC差值治疗组与对照组差异有显著性(P＜＝0.0239＜0.05)。治疗组WBC的回升明显高于对照组。
9
[0101] 表2两组患者治疗前后WBC变化情况(×10/L)
[0099] [0102]
组别例数治疗前治疗后1周治疗后2周治疗后3周3.55±1.625.07±1.34
治疗组545.82±1.383.75±1.58
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CN 101721612 A
说 明 书
例数治疗前
治疗后1周
治疗后2周治疗后3周3.36±1.654.35±1.310.3032
0.0239
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组别
对照组57P
[0103]
6.30±1.423.69±1.620.7206
0.8114
效果实施例2 动物实验研究
[0104] 1、实验动物及分组：C57BL/6J纯系小鼠，雌性，体重18～20g，8～10周龄，144只随机分成4组，每组36只，分别为本发明的中药组合物组、茜草双酯组、生理盐水组、正常组。
[0105] 2、给药方法：[0106] 中药组合物组：用实施例2方法所制的颗粒剂配制成液体，每天每只小鼠胃饲给药0.4ml(相当于生药40g/kg)；[0107] 茜草双酯组：每天每只小鼠饲胃给药0.4ml，相当于生药100mg/kg；[0108] 生理盐水组：每天每只小鼠胃饲给药0.4ml生理盐水；[0109] 正常组：不做任何处理。[0110] 3、实验方法：
[0111] 分别于给药的第2、4、6、8天，每组各取9只小鼠脱颈椎处死，钝性分离肌肉，取出股骨，迅速浸泡于2.5％戊二醛内，充分固定后，用1％锇酸后固定1.5小时，丙酮逐级脱水，EPON 812环氧树脂包埋，切片，染色，电镜下观察各组小鼠第2、4、6、8天超微结构变化。[0112] 4、结果：
[0113] 电镜下正常组小鼠骨髓可见各个不同分化阶段的粒系、红系造血岛，细胞排列整齐，边界清晰，易见早期未分化型细胞。[0114] 实验第4天，各用药组小鼠骨髓细胞明显减少，粒系受损严重，镜下可见少量红系造血岛。中药组合物组细胞膜完整，胞浆中线粒体略有肿胀，核内染色体无较大变化；茜草双酯组细胞膜较完整，线粒体亦肿胀；生理盐水组镜下一片荒芜，很少见到骨髓粒细胞，只见少量红系早期造血细胞。[0115] 实验第6天，中药组合物组镜下见骨髓细胞密集，边界清晰，并可见各个不同阶段的血细胞，细胞膜规整，胞浆中内器丰富，内质网略有扩张，线粒体肿胀。茜草双酯组见少量骨髓血细胞，细胞膜破裂，染色质外泻，血窦内皮细胞胞浆扭曲断裂，线粒体肿胀；生理盐水组骨髓内血细胞数量少，细胞膜不规整，核内异染色体凝集成块状。[0116] 实验第8天，中药组合物组内线粒体肿胀程度减轻；茜草双酯组镜下见造血细胞较前增多，胞浆内质网扩张明显，甚则呈囊状，有的细胞核膜不完整，以染色体凝集成斑块状，常染色体分布不均匀；生理盐水组骨髓内血细胞较前增多，细胞膜不规整，胞浆内质网扩张，线粒体肿胀明显。[0117] 5、总结
[0118] 化疗是治疗癌症的主要手段之一，但一些化疗药物对骨髓抑制比较严重，导致化疗中断，亦有并发重度感染而死亡。近年来国内外肿瘤学者及厂家纷纷研制造血细胞因子，如G-CSF，GM-CSF，在肿瘤治疗中发挥较好的辅助作用，但这些造血细胞因子价格比较贵，且
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有反跳现象。可引起骨痛、发热等副反应。近年来，中医中药在对肿瘤化疗患者升白作用俄临床研究中取得了一些进展，本发明的中药组合物不仅升高白细胞疗效明显，提高机体免疫力，而且还能改善中医症候和症状，是造血因子虽不具备的。[0119] 化疗患者大多数表现为乏力、口干、腰膝酸软、食欲不振、脉象虚软等气阴两虚证，本发明的中药组合物其组方原则为益气养阴，扶正培本，调整肿瘤患者机体内在的阴阳平衡、气血平衡。
[0120] 中医学认为气血来源于脏腑，两者相互滋生，相互依附，不可分离。其中有血，血中有气，气以生血养血，血以养气载气，气无血则不生，血无气则不长。补气则能生血，阴血同源，生血也能生阴。所以本发明的中药组合物在临床上同样适用于气虚患者，并取得了较满意的效果。
[0121] 动物实验表明，本实验的第4天，电镜下观察，茜草双酯组、生理盐水组小鼠骨髓的血窦遭到严重破坏，内皮细胞扭曲破裂，第6天，仍没有恢复正常，相反，本发明的中药组合物组造血功能恢复较快；保护和改善了骨髓造血微环境；升高白细胞，提高机体免疫力。[0122] 效果实施例3动物实验研究[0123] 1、实验动物、给药方法及分组ICR小鼠，雄性，体重18～22g。取小鼠78只，随机分为6组，每组13只，除正常对照组外，均接受Se-137放射源照射，照射后1天(1d)检测WBC，再据WBC随机分组，分别为：(1)正常对照组(蒸馏水20ml/kg/d)；(2)白细胞较少正模型组(蒸馏水20ml/kg/d)；(3)利可君组(20mg利可君/kg/d)；(4)中药组合物大剂量组(9.2g生药/kg/d)；(5)中药组合物中剂量组(4.6g生药/kg/d)；(6)中药组合物小剂量组(2.3g生药/kg/d)，分组后灌胃给药，每日一次。[0125] 2、白细胞减少症模型组
[0126] 小鼠接受Se-137放射源照射，剂量率为0.87Gy/min，总剂量为4Gy，照射后1天(1d)检测白细胞，白细胞降至4×109/L为白细胞减少症模型。[0127] 3、实验方法
[0128] 3.1外周血象检测[0129] 给药第4，7，10日，各组小鼠尾静脉取血，血细胞分析仪上进行白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白含量测定。
[0130] 3.2骨髓有核细胞计数(BMNC)[0131] 给药第10日，各组动物称重后脱臼处死，取右侧完整股骨，用3％醋酸液10ML冲出全部骨髓，使成单细胞悬液，显微镜下计数BMNC。[0132] 3.3脾结节计数(CFU-S)[0133] 给药第10日，脱臼处死各组小鼠，脾脏称重后如Bouin液保存，第2日计数脾凸面结节数，即为内源性脾结节数。[0134] 3.4胸腺、脾脏指数：称重各组小鼠胸腺、脾脏，其与体重之比即为胸腺、脾脏指数。
[0124]
3.5含药血清制备方法
[0136] 正常ICR小鼠随机分为3组，分别灌胃中药组合物、利可君或等体积生理盐水(NS)，每日给药2次，连续3日，末次给药或NS1.5小时后摘取小鼠眼球取血，存放于1.5ml
[0135]
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离心管中，室温静置3小时，3000r/min离心10min，分离血清，56℃灭活30min，备用。[0137] 3.6骨髓细胞增殖实验(MTT法)[0138] 取ICR小鼠6只，接受Se-137放射源照射，总剂量为3.5Gy，照射后第2日，无菌取小鼠双侧股骨，用RP-MI1640液冲出骨髓，过4号针头，使成单细胞悬液，洗细胞2次，弃上清，调细胞含量5×105/ml，于96孔培养板中每孔加入细胞悬液100μl，再加入含药或空白血清，每孔30μl，其中，中药组合物中、小剂量组每孔分别加含药血清20，10μl，并用空白血清不足体积至30μl，置5％CO2，37℃饱和湿度培养箱中培养24h后，每孔加入0.5％(5mg/ml)MTT20μl，继续培养4h，1000r/min离心15分钟，弃上清，每孔加入二甲亚砜(DMSO)200μl，充分混匀，静置数分钟，置酶标仪于波长570mm处检测吸光度(A)值，以此值代表骨髓细胞增殖程度。
[0139] 3.7造血祖细胞集落培养
[0140] 脱臼处死小鼠(照射模型6只)。在75％乙醇中浸泡3min，取完整股骨，用消毒纱布包裹，剔取肌肉，用注射器吸取RPMI1640液冲出骨髓细胞，通过4号针头过滤，使成单细胞悬液。
[0141] 无菌条件下，取容量10ml的离心管，加入3-4ml淋巴细胞分离液，将骨髓细胞加载分层液上，2000r/min离心15min，取出中间黄色的界面层，置于另一离心管，加含10％小牛血清的培养液洗涤2～3次，通过4号针头过滤，计数有核细胞，使其含量为2×105/ml，每个培养皿加入0.9ml此骨髓细胞悬液(每鼠细胞悬液重复2皿)，各个皿中再分别加入药物血清100μl。GM-CSF10ng，并加入3％琼脂100μl，轻轻摇晃，使其充分铺平，送入5％CO2，37℃饱和湿度培养箱中培养7d，在倒置显微镜下计数集落数，以多于40个细胞的克隆单位为1个集落。
+
[0142] 3.8CD34细胞检测
[0143] 照射模型小鼠照射后第2日随机分组，给药，给药第7日，用含牛血清白细胞浓度为0.2％的磷酸盐缓冲液(PBS)冲出小鼠股骨骨髓细胞，取1×106个细胞加入30μl正常小鼠血清以封闭非特异结合位点，加入10μl FITC标记的大鼠抗小鼠CD34抗体，对照管加入相应的对照抗体，4℃避光反应30min，加入2ml红细胞裂解液，作用5min，洗细胞2次，加入终浓度为3μg/ml(微克/毫升)的碘化丙啶(PI)染液，上流式细胞仪检测，记录绿色荧光。
[0144] 4、结果
[0145] 4.1对小鼠WBC的影响[0146] 照射可使小鼠WBC下降，与正常组比较差异有显著性，中药组合物灌胃可明显升高模型小鼠WBC，在给药第4日4.6g/kg/d剂量组小鼠WBC与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，在给药第7和10日，中药组合物各剂量组WBC与模型组比较均有增加，有显著性差异(表3)。
[0147] 表3中药组合物对小鼠WBC的影响
[0148]
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4.2对小鼠脾结节计数和骨髓有核细胞数的影响
[0150] 给与中药组合物可以升高模型小鼠CFU-S及BMNC，与模型组比较差异有显著性(表4)。
[0149]
表4中药组合物对小鼠脾结节、骨髓有核细胞数、
[0152] 胸腺指数和脾脏指数的影响
[0151] [0153]
4.3对小鼠骨髓细胞增殖的影响
[0155] 实验结果显示，中药组合物血清对照模型小鼠骨髓细胞增殖具促进作用(表5)。[0156] 表5药物血清对小鼠骨髓细胞增殖的影响
[0154] [0157]
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4.4药物血清对粒-单系造血祖细胞集落(CFU-GM)形成的影响
[0159] 中药组合物血清能够促进小鼠CFU-GM增殖，与对照组比较差异有显著性(P＜0.001)，表明中药组合物对粒-单系造血祖细胞集落增殖具促进作用(表6)。[0160] 表6药物血清对粒单系造血祖细胞集落(CFU-GM)形成的影响
[0158] [0161]
剂量
组别
/g/kg
正常
-
血清添加量/μl100100100
CFU-GM/个21.8±4.743.8±7.534.5±6.6
中药组合物9.2利可君
[0162]
0.02
4.5对小鼠CD34+细胞的影响
[0163] CD34造血细胞包含造血干细胞和造血祖细胞，小鼠骨髓中CD34+细胞的比例，可反映骨髓中造血干祖细胞的数量，本实验结果显示，药物能增加照射模型小鼠中CD34+细胞的比例，提示药物有促进骨髓造血干/祖细胞增殖的作用(表7)。
+
[0164] 表7药物对小鼠骨髓CD34细胞的影响
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结论：本发明的中药组合物可明显升高模型小鼠的白细胞(WBC)；可升高模型小
鼠的骨髓有核细胞计数并促进骨髓细胞增殖；可升高脾结节计数，提高粒单系集落形成单位产率，提高骨髓CD34细胞比例，对造血干/祖细胞增殖具有促进作用；具有保护模型小鼠骨髓造血微环境作用；可升高模型动物胸腺指数，具有一定的免疫增强作用。
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