免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法测定小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇

Technology科技分析与检测免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法测定 小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇□ 王　果　郭芳芳　江苏省理化测试服务中心摘　要：使用小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）免疫亲和柱结合高效液相色谱法（HPLC）测定方法。使用该方法简便、快速、灵敏度高，能准确检测出小麦粉中雪腐镰刀菌烯醇含量。经水提取后，采用免疫亲和柱净化，通过高效液相色谱-紫外检测器测定，检测小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，根据峰面积定量。实践研究显示：小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇经水提取，免疫亲和柱净化后检测线性较好，相关系数大于等于0.999，定量限为16 μg/kg，脱氧雪腐镰刀菌烯醇加标回收率为90.6%，RSD为2.1%。关键词：免疫亲和柱净化；高效液相色谱法；脱氧雪腐镰刀菌烯醇品中的常见的一种污染性真菌毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇是谷物等制柱是日常饮食中常见的污染霉菌毒素之注射器相连接，先将低温保存的免疫（2）净化：将真空压力泵与玻璃150 mm，柱内径为C18柱（填料粒径5 μm，柱长一；因此灵敏、快速、准确的分析方亲和柱恢复至室温，再插到玻璃注射3.2.2　样品的检测4.6 mm）。法对保护人类健康至关重要器上，待柱内原有液体流至柱体下端 测工作中小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌[1]。在检1 cmμL，根据以上液相色谱条件烯醇都是有检出的。如果食用过量的中过柱，直至空气进入柱中左右后，将2 mL上清液转移至柱求脱氧雪腐镰刀菌烯醇会对人体的免疫色谱水淋洗亲和柱，[3]。用离子（DON）的含量。出采用峰面积定量，进样20 小麦粉中脱氧雪保留时间定性，腐镰刀菌烯醇系统产生影响并会导致厌食、腹泻、抽干免疫亲和柱，弃去全部流出液。直至空气进入柱中，4　分析结果呕吐等中毒表现，故脱氧雪腐镰刀菌4.1　脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准色谱图烯醇又称为呕吐毒素。薄层色谱测定洗脱免疫亲和柱，并收集全部洗脱液（3）洗脱：准确加入1 mL甲醇法、至试管中根据色谱条件，得到没有拖尾、分离免疫亲和柱结合高效液相色谱法同位素稀释液相色谱免疫亲和柱结合高效液相色谱法、用洗脱的滤液于进样小瓶中以备进样。0.45 μm；涡旋有机滤膜过膜，收集甲醇30 s混匀溶解残留物，度良好的标准色谱图[4]测脱氧雪腐镰刀菌烯醇常用的方法-串联质谱法是检4.2　检出限及线性。本文使用免疫亲和柱结合高效液相色[2]。3.2　仪器条件及检测谱法检测小麦粉中的呕吐毒素，能很3.2.1　液相色谱条件个色谱标准点峰面积。以相关系数及线性回归方程是根据好地满足实验分析标准。1　仪器及试剂速流动相为甲醇∶水（1∶4）；流限定义为定量限，在该色谱条件下，3倍的检出5柱温0.8 mL/min；检测波长35 ℃；进样量20 μL；液相色谱218 nm；脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回归方程、相关系数及定量限见表1。柱、紫外检测器或二极管阵列检测器脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和（Agilent化合物表1　脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回归方程、相关系数及定量限涡旋振荡器、离心机、真空压力泵与高效液相色谱仪）、超声波、玻璃注射器。DONy=6.17236x-0.1021回归方程相关系数0.9998定量限(mg/kg）52　标准储备溶液及标准工作溶液4.3　精密度试验及加标回收率麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇[J].粮食与取标准储备溶液（25 μg/mL）：移饲料工业,2018.瓶中，用乙腈定容至刻度线，并存放1 mL标准储备溶液于10 mL容量DON，结果显示脱氧雪腐镰刀菌烯醇本方法采用检测小麦粉中的[2]何伟杰,刘易科,朱展望,等.镰于4 ℃的环境中保存。有mg/kg，检出。小麦粉中DON含量刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇脱毒菌及脱毒酶研究进展[J].植物病理学报,2019 量的配制好的储备溶液，用标准工作溶液配制：准确移取适5　结论回收率为90.6%，RSD为为2.1%。120 (1):12-14.分别稀释成浓度为10%乙腈2、5 μg/mL色谱法检测小麦粉中的脱氧雪腐镰刀菌使用免疫亲和柱净化结合高效液相[3]栾振祥.小麦中脱氧雪腐镰刀菌3　实验方法的标准工作溶液。0.1、0.2、0.5、1、烯醇，方法灵敏、快速、准确，处理样烯醇的液相色谱检测与胶体金试纸法分析比较[J].现代食品,2018(19):204-206.[4]沈萍,蒋晨,汪小平.免疫亲和3.1　小麦粉样品的前处理品时工作量小，为检测人员检测其他谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇提供参考。柱净化-高效液相色谱快速测定玉米中的样品，（1）加入提取：称约10 mL水涡旋混匀2 g（准确到0.001）参考文献脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法初探[J].上海并超声后离心，取2 mL上清液。1 min， [1]王伟,刘安法,李明奇,等.免农业科技,2018(2):102-106.疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测小132 食品安全导刊 2019年6月