RhD阴性确认试验

RhD阴性确认试验

1 原理

由D抗原位点数减少或抗原结构产生变异所产生的一些弱D和不完全D红细胞，它们虽然有RhD抗原，但与常规使用的抗D定型试剂不凝集或弱凝集。确定这些红细胞上是否有D抗原存在需进一步采用含IgG抗D抗体的试剂进行抗球蛋白试验以提高试验灵敏度，达到检测弱D的目的，以及采用抗不同D表位的抗D抗体，测定37种D表位中的不同D表位，达到检测不完全D表型的目的。当确定红细胞上无D蛋白表达时，才能最终判定被检标本为RhD阴性。

2 试剂与材料

抗D定型试剂；IgM+IgG抗D；抗人球蛋白试剂，多特异性抗球蛋白或抗IgG；IgG致敏红细胞； 2～5%受检者的红细胞。

3 方法

3.1 在1支标记的干净试管中加入1滴IgM+IgG抗D，在第2支试管中加入1滴合适的对照试剂；

3.2 在2支试管中各加入1滴2～5%受检者的红细胞悬液；

3.3 混匀，并在37℃孵育15～30分钟(根据试剂说明书)；900～1000g离心15～45秒；

3.4 轻轻重新悬浮细胞扣并观察凝集反应，如受检红细胞与抗D管凝集而与试剂对照管不凝集，可记录受检标本为阳性结果，不必作抗球蛋白试验；

3.5 如不凝集，则用大量盐水洗涤细胞3～4次；最后一次洗涤后，把盐水倾倒干净，吸干试管边缘；

3.6 加1～2滴抗人球蛋白试剂(根据试剂说明书), 轻轻混匀，并以900～1000g离心15～30秒；

3.7 轻轻冲洗悬浮细胞扣并观察凝集反应；

3.8 如果试验为阴性，加入已知IgG致敏红细胞，再次离心，检查凝集。

4 结果判读

4.1 抗D试管出现凝集而对照管无凝集时，是阳性结果，判为RhD阳性；

4.2 抗D试管无凝集反应者是阴性结果，表明红细胞没有D抗原，判为RhD阴性；

4.3 如果试剂对照管凝集，则不能对这次RhD阴性确认试验作出有效的解释，这种情况下，对择期受血者，在RhD血型未确定前，应先输RhD阴性血液；如果受检细胞是献血员，该血液不应用于临床。

5 注意事项

5.1 确认试验中所选用的IgM+IgG抗D单克隆抗体所识别的D表位应与初筛使用

的IgM抗D识别的D表位不同。

5.2 本项试验中所检出的不完全D表型的进一步分类需使用特殊的不完全D诊断试剂。

5.3 可采用检测RhD基因的方法诊断RhD血型。