大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺损伤后Toll样蛋白受体4核转录因子-κB的作用研究重点

中华老年医学杂志２０１６年６月第３５卷第６期ＣｈｉｎＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｊｕｎｅ２０１６，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．６６４７・基础研究・大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺损伤后Ｔｏｌｌ样蛋白受体４／核转录因子一ＫＢ的作用研究李晓平张卫东姜涛杜洪印王文辰任宏李磊祖红林夏彦民杨波３００１９２天津市第一中心医院胸外科（李晓平、张卫东、李磊、杨波），麻醉科（杜洪印），血管外科（祖红林）；７１００３８第四军医大学唐都医院胸外科（姜涛、王文辰、夏彦民）；７１００６１西安交通大学医学院第一附属医院胸外二科（任宏）通信作者：杨波，Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｇｂｏｃｈｅｓｔ＠１２６．ｃｏｒｎ；姜涛，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｔａｏｃｈｅｓｔ＠１６３．ｃｏｍＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．０２５４—９０２６．２０１６．０６．０２０【摘要】目的研究大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺缺血再灌注损伤后Ｔｏｌｌ样蛋白受体４（ＴＩ。Ｒ一方法４）／核转录因子一ｘＢ（ｎＦ—ｘＢ）表达的影响及可能作用机制。将健康雄性ＳＤ大鼠６０只随机分为４组，每组１５只：第１组即对照组；第２组即盐酸氨溴索组；第３组即肺缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）组；第４组即Ｉ／Ｒ＋盐酸氨溴索组。第２、４组造模前给予静脉注射盐酸氨溴索０．７５ｇ／Ｌ，第１、３组造模前给予注射与治疗量等容量的生理盐水。观察肺组织病理学改变并评分，检测湿干重比值（Ｗ／Ｄ）、白介素１８（ＩＩ。一１１３）、肿瘤坏死因子ｄ（ＴＮＦ—ａ）、ＮＦ—ＫＢ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法观察大鼠肺组织ＴＩ。Ｒ４的表达。结果与第１组相比，第３组肺泡壁增宽，肺泡腔内可见出血等炎症表现，Ｗ／Ｄ、炎性因子显著升高，肺组织Ｗ／Ｄ、ＩＬ一１Ｄ、ＴＮＦａ、ＮＦｘＢ和ＴＬＲ４表达明显升高；与Ｉ／Ｒ组相比，第４组肺泡腔内出结血、水肿等炎症表现减轻，Ｗ／Ｄ、炎性因子显著降低，肺组织ＮＦ—ＪｏＢ及ＴＩ。Ｒ４表达量明显降低。论大剂量盐酸氨溴索通过下调ＴＩ。Ｒ４／ＮＦ－ｘＢ信号通路发挥对肺缺血再灌注损伤大鼠的保护作用。【关键词】氨溴索；急性肺损伤；Ｔｏｌｌ样受体４；ＮＦ—ｘＢ基金项目：国家自然科学基金（８１０７００６２），军队“十二五”课题（１２ＭＡ２０８）Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｌａｒｇｅ－ｄｏｓｅｏｆＡｍｂｒｏｘｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｏｎＴｏｌｌ—ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４／Ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｒａｔｓｗｉｔｈｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙＬｉＸｉａｏｐｉｎｇ。ＺｈａｎｇＷｅｉｄｏｎｇ，Ｊｉａｎｇｎｏ。ＤｕＨｏｎｇｙｉｎ．ＷａｎｇＷｅｎｃｈｅｎ，ＲｅｎＨｏｎｇ，ＬｉＬｅｉ，ＺｕＨｏｎｇｌｉｎ，ＸｉａＹａｎｍｉｎ，ＹａｎｇＢｏＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＴｉａｎｊｉｎＦｉｒｓｔＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１９２，Ｃｈｉｎａ（ＬｉＸＰ，ＺｈａｎｇＷＤ，ＬｉＬ，ＹａｎｇＢ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＶａｓｃｕｌａｒＳｕｒｇｅｒｙ，ＴｉａｎｊｉｎＦｉｒｓｔＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１９２，Ｃｈｉｎａ（Ｄ“Ｈｙ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＴａｎｇｄｕＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｈｅＦｏｕｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００３８，Ｃ＾ｉｎａ（ＪｉａｎｇＴ，ＷａｎｇＷＣ，ＸｉａＹＭ）；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｈｏｒａｃｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔ７１００６１，Ｃｈｉｎａ（ＲｅｎＨ）ＣｏｒｒＰｓ户ｏ”ｄｉ”ｇａｕｔｈｏｒ：ＹａｎｇＢｏ，Ｅｍａｉｌ：ｙａｎｇｂｏｃｈｅｓｔ＠１２６．ＣＯ？ＴＩ；Ｊｉａｎｇ丁么ｏ，Ｅｍａｉｌ：ＪｉａｎｇｔａｏｃｈｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ（，ｆｘｉｊａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｘｉａｎ＠１６３．ｃｏｒｎ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｌａｒｇｅ—－ｄｏｓｅｏｆＡｍｂｒｏｘｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｎＴｏｌｌ——４（ＴＬＲ４）／Ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ—ｋａｐｐａＢ（ＮＦ－ＫＢ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｒａｔａｆｔｅｒｌｕｎｇｒａｔｓｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｉｕｒｙ（ＬＩＲＩ），ａｎｄｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．ｒａｎｄｏｍｌｙａｓｓｉｇｎｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓ（ｎ一１５，ｅａｃｈ）：ｔｈｅｆｉｒｓｔＭｅｔｈｏｄｓ６０ｈｅａｌｔｈｙＳＤｗｅｒｅｇｒｏｕｐ（ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｇｒｏｕｐ（Ａｍｂｒｏｘｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｇｒｏｕｐ），ｔｈｅｔｈｉｒｄｇｒｏｕｐ（ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｇｒｏｕｐ，Ｉ／Ｒ），ａｎｄｔｈｅｆｏｕｒｔｈｇｒｏｕｐ（Ｉ／Ｒ＋ａｍｂｒｏｘｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｇｒｏｕｐ）．Ｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｎｄｆｏｕｒｔｈｖｏｌｕｍｅｏｆｓａｌｉｎｅ．ＴｈｅＬＩＲ—ｉｎｄｕｃｅｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｗｅｒｅｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｅｉｖｅｄｅｑｕａｌｗｅｔ—ｔｏ—ｄｒｙＫＢＡｍｂｒｏｘｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ０．７５９／１ｂｙｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｆｉｒｓｔａｎｄｔｈｉｒｄｇｒｏｕｐｓｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｇｒａｄｅｄ．Ｔｈｅｗｅｉｇｈｔｒａｔｉｏ，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１Ｂ（ＩＬ－１８），ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ—ａ（ＴＮＦ－ａ），ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ（ＮＦ－ＫＢ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＬＲ４ｉｎｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅＩ／Ｒｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｈｉｃｋｅｎｅｄａｌｖｅｏｌａｒｗａｌｌ，ａｌｖｅｏｌａｒｈｅｍｏｒｒｈａｇｅａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｈａｎｇｅｓｉｎｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄ，ａｎｄｔｈａｔｔｈｅｗｅｔ—ｔｏ—ｄｒｙｗｅｉｇｈｔｒａｔｉｏ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ．ＴｈｅａｌｖｅｏｌａｒｏｆＩＬ一１Ｂ，ＴＮＦ—ｄ，ＮＦ—ＫＢａｎｄＴ１．Ｒ４ｃｈａｎｇｅｓｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ，ｅｄｅｍａａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｌｕｎｇ万方数据中华老年医学杂志２０１６年６月第３５卷第６期ＣｈｉｎＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｊｕｎｅ２０１６，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．６ａｌｌｅｖｉａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｗｅｔ—ｔｏ—ｄｒｙｗｅｉｇｈｔｒａｔｉｏ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ＮＦ－ＫＢａｎｄｖｅｒｓｕｓＴＬＲ４ｉｎ１ｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎＩ／Ｒ＋ａｍｂｒｏｘ０１ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｇｒｏｕｐｔｈｅＩ／Ｒｇｒｏｕｐ，．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅｌａｒｇｅ－ｄｏｓｅｏｆＡｍｂｒｏｘｏｌｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｈａｓｒａｔａｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎｌｕｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅＨｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｔｈｒｏｕｇｈｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＴＬＲ４／ＮＦ—ＫＢｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ；Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４；Ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ—ｋａｐｐａＢ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ａｍｂｒｏｘｏｌ；Ｆｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＮａｔｉｏｎａｌＣｈｉｎａ（８１０７００６２）；ＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｊｅｃｔｄｕｒｉｎｇｔｈｅＴｗｅｌｆｔｈＦｉｖｅ—ｙｅａｒＰｌａｎＰｅｒｉｏｄ（１２ＭＡ２０８）ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆ随着现代胸外科的发展，尽管脏器的保存、外科手术操作和围术期处理有了很大改进，但是，肺缺血再灌注损伤仍然是导致早期高发病率和晚期高病死率最重要的原因［１］。大量临床研究证实，盐酸氨溴索大剂量应用时可对肺脏发挥抗炎、抗氧化等保护作用［２‘３Ｊ。我们前期研究发现预先给予大剂量盐酸氨溴索对鼠肺移植术后急性肺损伤有重要的保护作用，减轻大鼠肺脏炎性损害，但其具体机制未进一步研究［２］。本实验于２０１４年６月至２０１４年１２月对大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤后Ｔｏｌｌ样蛋白受体４／核转录因子一ＩｃＢ（ＴＬＲ４／ＮＦ—ＫＢ）的影响进行了探讨，以期为其临床应用提供更多的理论和实验依据。材料和方法一、材料１．实验动物：健康成年雄性ＳＤ大鼠６０只，由第四军医大学实验动物中心提供。体重２００～２３０ｇ，实验前常规饲养１周。２．实验器材及试剂：Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ蛋白电泳仪（Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司），盐酸氨溴索（勃林格殷格翰公司），兔抗大鼠ＴＬＲ４抗体、兔抗大鼠ｐ－ａｃｔｉｎ抗体、辣根过氧化酶标记的羊抗兔ＩｇＧ（美国Ｓｉｇｍａ公司），ＢＣＡ蛋白定量试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）、双荧光素酶报告系统试剂盒（深圳华安平康生物科技有限公司）。二、方法１．动物模型建立、分组及给药：健康成年雄性ＳＤ大鼠随机分为对照组、盐酸氨溴索组、Ｉ／Ｒ组和Ｉ／Ｒ＋盐酸氨溴索组，每组１５只。盐酸氨溴索组和Ｉ／Ｒ＋盐酸氨溴索组在造再灌注模型前３０ｍｉｎ给予静脉注射盐酸氨溴索０．７５ｇ／Ｌ，对照组和Ｉ／Ｒ组则注射与上述治疗量等容量的生理盐水。腹腔注射１％戊巴比妥４０ｍｇ／ｋｇ麻醉后，将大鼠仰卧固定于手术板上，经口气管插管，并连接呼吸机，呼吸机辅助通Ｏ：（６０％），最高峰压在１０ｃｍＨ：Ｏ，最万方数据大呼气末压力为２ｃｍＨ：Ｏ（１ｃｍＨ：Ｏ一０．０９８ｋＰａ）呼吸频率６０次／ｍｉｎ，呼吸比２：３，潮气量为９ｍｌ，这些参数可以排除其他原因导致的急性肺损伤。胸部备皮常规消毒后铺巾，无菌条件下取右侧第４肋间前外侧切口入胸，分离肌层，剪开胸膜，游离右肺门，尾静脉注射肝素５０Ｕ，混合盐水总体积５００肚ｌ，待５ｍｉｎ后肝素开始发挥作用，以无创伤动脉夹夹闭肺门处血管，缝合切口，６０ｍｉｎ后经原切口进胸，取出动脉夹，恢复血供，形成缺血再灌注。对照组及盐酸氨溴索组全麻后，操作方法同上述，但不需夹闭肺门。２．肺组织湿／干重比值（Ｗ／Ｄ）：样本右肺组织上叶称湿重后７０℃电热恒温干燥箱中烤２４ｈ后为干重，计算肺组织Ｗ／Ｄ。３．ＨＥ染色：中叶肺组织置于甲醛固定、石蜡包埋、切片、染色，光镜下观察肺组织病理学变化。４．酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）：麻醉处死大鼠，结扎肺门，支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）收集大鼠炎性因子，在４℃下灌洗液离心１０００ｒ／ｍｉｎ５ｍｉｎ后取上清。依据说明产品说明书进行ＢＣＡ蛋白定量。通过ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＩＩ。一１Ｊ３和ＴＮＦ一Ⅱ水平的表达。５．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测：肺组织加入细胞裂解液、充分匀浆，于４℃离心后，用ＢＣＡ法进行蛋白定量，加上样缓冲液并煮沸５ｍｉｎ，上样１０肚ｌ，进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ并转移到ＰＶＤＦ膜上。滴加５０ｇ／Ｌ脱脂奶封闭１ｈ后，分别滴加兔抗大鼠ＴＬＲ４抗体、ｔ？－ａｃｔｉｎ抗体（室温封闭ｌｈ）及辣根过氧化酶标记的羊抗兔ＩｇＧ二抗（室温封闭１ｈ）。滴加ＥＣＬ反应混合液，置入仪器观察结果分析灰度值。６．免疫组化：常规石蜡切片，常规二甲苯、梯度酒精脱蜡至水后，３ｍｏｌ／Ｌ尿素消化，柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ６．ｏ）进行抗原修复，新鲜配制３％Ｈ：Ｏ：封闭，滴加血清封闭液３０ｍｉｎ，甩去血清，加一抗ＮＦ—ＩｃＢｐ６５（１：１５０），４。Ｃ冰箱孵育过夜，３７℃复温，滴加试剂Ｂ（生物素标ｉｇ－－抗），室温３７＾Ｃ孵育４５ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗，试剂Ｃ（亲和素）室温孵育室温３７℃孵育４０ｍｉｎ。滴加新鲜配制的ＤＡＢ显色液中华老年医学杂志２０１６年６月第３５卷第６期ＣｈｉｎＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｊｕｎｅ２０１６，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．６◆一◆◆◆避光显色，５～１０ｍｉｎ后中止显色，水洗，再以苏木三、大剂量盐酸氨溴索对大鼠ＩＬ—ｌＧ和ＴＮＦ—ａ素染色，依次经乙醇梯度脱水、二甲苯透明及中性炎性因子的影响树胶封片。设置空白对照以ＰＢＳ代替一抗，其余大鼠肺缺血再灌注损伤后，ＩＬ一１Ｂ和ＴＮＦ—ａ炎步骤同上。症因子的水平明显升高；大剂量盐酸氨溴索能显著三、统计学方法降低ＩＬ一１口和ＴＮＦ—Ｑ炎症因子的水平表达量（Ｐ＜采用ＳＰＳＳ１９．０统计软件包括进行分析，所有０．０１），见表１。数据均以孑±Ｓ表示，两组间的比较采用Ｔｕｋｅｙ’Ｓｔ四、肺组织ＴＬＲ４蛋白水平量的表达检验，Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。对照组与盐酸氨溴索组中ＴＬＲ４几乎无明显变化；Ｉ／Ｒ组中肺组织ＴＬＲ４的表达量显著增多结果（Ｐ＜ｏ．０５）；而］／Ｒ＋盐酸氨溴索组ＴＬＲ４表达量相对降低（Ｐ＜ｏ．０１），见表１，图５。一、大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺组织的影响Ｉ／Ｒ一一＋＋对照组和盐酸氨溴索组大鼠肺组织小叶结构盐酸氨澳索一十一＋清晰，肺泡腔内无明显渗出，肺泡间质无明显炎性ＴＬＲ４－’’’’１０００００浸润，肺泡壁无明显增厚；而Ｉ／Ｒ组大鼠肺泡壁增宽，肺泡间质有炎性浸润，肺泡腔内可见大量出血Ｂ－ａｃｔｉ“●—，—＿－—－－４２０００和渗出等炎症表现；Ｉ／Ｒ＋盐酸氨溴索组大鼠肺泡图５Ｗｔ州ｃｒｎ—ｂｌｏｔ检测７Ｉ－Ｉ。ＲＩ蛋白含量壁明显变薄，肺泡腔内出血量减少，炎性渗出减少，见图ｌ～４。五、大剂量盐酸氨溴索对大鼠ＮＦ—ｘＢ活性的二、大剂量盐酸氨溴索对大鼠肺组织Ｗ／Ｄ的影响影响肺组织ＮＦ－ｘＢ蛋白在对照组与盐酸氨溴索组与对照组与盐酸氨溴索组相比较，Ｉ／Ｒ组肺组胞浆、胞核中无表达。与对照组相比较，Ｉ／Ｒ组织湿干重比值明显升高（Ｐ＜０．０５），而Ｉ／Ｒ＋盐酸ＮＦ—ＫＢ蛋白在胞浆和胞核中表达量明显增多，处氨溴索组肺组织湿干重比值明显降低（Ｐ＜ｏ．０１），于活化状态；而Ｉ／Ｒ＋大剂量盐酸氨溴索组ＮＦ一，ｃＢ见表１。蛋白在胞浆和胞核中表达量相对减少（图６～９）。，墓．．，◆≯ｒ，。、０譬黟￡譬－睽Ｏ，麟吐０．’图６对照组大鼠肺组织表现图７盐酸氨溴索组大鼠肺组织表现图８Ｉ／Ｒ组大鼠大鼠肺组织表现图９Ｉ／Ｒ＋大剂量盐酸氨溴索大鼠肺组织表现免疫组化染色×４００万方数据６５０中华老年医学杂志２０１６年６月第３５卷第６期ＣｈｉｎＪＧｅｒｉａｔｒ，Ｊｕｎｅ２０１６，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．６表１盐酸氨溴索对大鼠肺组织相关指标的影响（『＋ｓ）讨论缺血再灌注损伤被认为是组织器官致伤的潜在重要因素，更是器官移植术后的常见并发症［４］。ＴＬＲ４是识别ＬＰＳ、炎症因子、活性氧的最主要受体，ＴＬＲ４表达的水平决定着肺内炎症反应的程度［５］。研究还发现，氧化磷脂类（（）ｘＰＡＰＣ）同样是重要的直接致损因素，而ＯｘＰＡＰＣ也正是通过触发ＴＬＲ４而进一步导致ＡＩ。Ｉ发生Ｌ６］。因此，在众多导致ＡＬＩ的机制中，ＴＬＲ４信号通路发挥着关键作用。已知ＴＬＲ４／ＮＦ一．ｃＢ信号传导通路的激活是直接导致再灌注损伤的主要因素之一［５’“。若能阻断ＴＬＲ４／ＮＦ—ＫＢ信号传导通路，调控炎症反应的发生发展，可有效减轻机体组织的损伤。国内外关于大剂量盐酸氨溴索对肺缺血再灌注损伤的肺保护作用机制报道较少，延续前期课题，我课题组进一步研究发现，Ｉ／Ｒ＋盐酸氨溴索组可减轻大鼠肺水肿，降低ＩＬ一１｜３和ＴＮＦ—ａ水平表达，同时抑制ＮＦ—ＫＢ转录活性，Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ检测发现ＴＬＲ４蛋白表达水平显著下降。提示大剂量盐酸氨溴索可能通过下调ＴＬＲ４蛋白的表达，减少下游ＴＲＡＦ６作用于ＩＫＫ０：／Ｊ３／７复合物，从而抑制ＮＦ—ＫＢ的活化，最终缓解肺水肿、减轻肺组织炎症反应，保护肺泡上皮细胞的作用口］。利益冲突：无参考文献［１］ＺｈａｎｇＣ，Ｇｕｏｚ，ＬｉｕＨ，ｅｔａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆ万方数据ｌｅｖｏｓｉｍｅｎｄａｎｐｏｓｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｒａｔｌｕｎｇｃｅｌｌｓｉｎａｍｏｄｅｌｏｆｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１５，１０（１）：ｅ０１１４９６３．ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１１４９６３．［２］李明江，张卫东，王旭晖，等．大剂量盐酸氨溴索对鼠肺移植后急性肺损伤的影响［Ｊ］．中华老年医学杂志，２０ｉ２，３１（ｉ）：７卜７２．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．０２５４—９０２６．２０１２．０１．０２３．ＬｉＭＪ，ＺｈａｎｇＷＤ，ＷａｎｇＸＨ，ｅｔａ１．ＣｕｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆａｍｂｒｏｘｏｌｉｎｌａｒｇｅｄｏｓｅｏｎｌｕｎｇｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｒａｔｓＪ］．ＣｈｉｎＪＧｅｒｉａｔｒ，２０１２，３１（１）：７１７２．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４—９０２６．２０１２．０１．０２３．［３］Ｉ。ｕＤ，ＭａＪ，ＹａｎｇＸ．ＳａｌｍｅｔｅｒｏｌｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅｐｒｏｐｉｏｎａｔｅｉｍｐｒｏｖｅｄＣＯＰＤｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｄｕｒｉｎｇｓｔａｂｌｅｓｔａｇｅ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣｌｉｎＥｘｐＭｅｄ，２０１４；７（９）：２９０７—２９１１．［４１ＹａｎｇＢ，ＮｉＹＦ，ＷａｎｇＷＣ，ｅｔａ１．ＭｅｌａｔｏｎｉｎａｔｔｅｎｕａｔｅｓｉｎｔｅｓｔｉｎａＩｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓｂｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＮＤＲＧ２［Ｊ］．ＪＳｕｒｇＲｅｓ，２０１５，１９４（１）：２７３—２８０．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｊＳＳ．２０１４．１１．０１８．［５］ＺｈｏｕＺ，ＺｈｕＸ，ＣｈｅｎＪ，ｅｔａ１．ＴｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＴｏｌｌ—‘ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙａｎｄｈｙｐｏｘｉａ——ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒｉｓｉｎｌｕｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＪＳｕｒｇＲｅｓ，２０１４，１８８（１）：２９０—２９７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｊＳＳ．２０１３．１１．１０８６．［６２ＩｍａｉＹ，ＫｕｂａＫ，ＮｅｅｌｙＧＧ，ｅｔａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄＴｏｌｌ—ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４ｓｉｇｎａｌｉｎｇａｓａｋｅｙｐａｔｈｗａｙｏｆａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００８，１３３（２）：２３５—２４９．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００８．０２．０４３．［７］ＳｈｉｍａｍｏｔｏＡ，ＰｏｈｌｍａｎＴＨ，ＳｈｏｍｕｒａＳ。ｅｔａ１．Ｔｏｌｌ一１ｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４ｍｅｄｉａｔｅｓ１ｕｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＡｎｎＴｈｏｒａｃＳｕｒｇ，２００６，８２（６）：２０１７－．２０２３．Ｅ８］ＹａｎｇＢ，ＬｉＸＰ，ＮｉＹＦ，ｅｔａ１．ＰｒｏｔｅｅｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＩｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎｏｎＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ－ＩｎｄｕｃｅｄＡｃｕｔｅＬｕｎｇＩｎｊｕｒｙｉｎＭｉｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１６，３９（１）：１２９—１３７．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１０７５３－０１５－０２３１—０．（收稿日期：２０１５—０２—２７）（本文编辑：孟丽）