小鼠局灶性脑中风模型研究进展

２０１５年２月　中国比较医学杂志　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　Ｃ０ＭＰＡＲＡＴＩＶＥ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１５　Ｖ０１．２５　ＮＯ．２　第２５卷第２期　小鼠局灶性脑中风模型研究进展　闫　峰　，左　玮　，罗玉敏　（１．首都医科大学宣武医院脑血管病研究室，北京１０００５２；２．中国医学科学院药物研究所，北京１０００５０）　【摘要】　中风是包括大脑缺血性中风，大脑出血性中风（ＩＣＨ）和蛛网膜下腔出血性中风（ＳＡＨ）在内的一类　神经系统性疾病，其发病率和死亡率居高不下。制作方法简单，可重复性好的动物模型是研究中风损伤发病机制　和治疗方法不可或缺的载体，损伤位置、体积、神经功能缺损和脑血流量变化，都可以用来评估模型对于各种治疗　方法的潜力。本文将对小鼠的缺血性中风、出血性中风模型的制作方法和经验进行总结同时介绍几种小鼠中风模　型的评价方法。　【关键词】　小鼠；脑出血；脑缺血　【中图分类号】Ｒ３３　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７１—７８５６（２０１５）０２－００５０￣４　ｄｏｉ：１０．３９６９．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１．７８５６．２０１５．００２．０１３　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｆｏｃａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｓｔｒｏｋｅ　ＹＡＮ　Ｆｅｎｇ。ＺＵＯ　Ｗｅｉ　，ＬＵＯ　Ｙｕ—ｍｉｎ　，（Ｉ．Ｘｕａｎ—Ｗｕ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃａｐｉｔａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，１０００５３，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ｐｅｋｉｎｇ　Ｕｎｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００５０）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｓｔｒｏｋｅ　ｉｓ　ａ　ｃｌａｓｓ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ，ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ（ＩＣＨ）ａｎｄ　ｓｕｂａｒａｃｈｎｏｉｄ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ（ＳＡＨ），ｗｈｉｃｈ　ｈａｓ　ａ　ｈｉｇｈ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ．Ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｉｓ　ｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｒｏｋｅ　ｉｎｓｕｌｔ．Ｌｏｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｉｚｅ　ｏｆ　ｉｎｊｕｒｙ，ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｅｆｉｃｉｔｓ　ａｎｄ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｆｌｏｗ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｓｓｅｓｓ　ｔｈｅ　ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ　ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ　ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｍｏｄｅｌ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｗｅｒｅ　ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ａｒｔｉｃｌｅ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｍｏｕｓｅ；Ｍｏｄｅｌ；Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ；Ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ；Ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｓｔｒｏｋｅ　中风具有高发病率、高致残率、高死亡率、高　复发率的特点，是目前人类死亡的三大主要疾病之　一的缺血性中风、出血性中风模型的制作及评价方法　进行综述。　１　小鼠缺血性中风模型的制作　，给社会和家庭带来沉重的负担　。近年来随着　基因工程的发展，各种人造的基因缺失或者过表达　的小鼠品系的出现为中风的研究带来了广阔的前　１．１　颞肌下开颅大脑中动脉闭塞【ｄＭＣＡＯ）模型　景。脑中风模型的应用也逐渐由大鼠模型向小鼠　中风模型发展，利用小鼠中风模型进行神经保护的　开创性实验取得了巨大的成功　。本文将对小鼠　Ｔａｍｕｒａ等　首次提出并建立一种开颅电凝的　ＭＣＡＯ模型，经典方法为：小鼠麻醉后侧卧，去除其　一侧眼与耳之间的被毛，剪开皮肤约０．８　ｃｍ，暴露　［作者简介］闫峰（１９８４一），男，技师，硕士研究生，研究方向：脑血管病，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｆｅｎｇ＠ｃｃｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。　【通讯作者］罗玉敏（１９６５一），女，研究员，研究方向：脑血管病，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｕｍｉｎｌ１１＠ｃｃｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。　中国比较医学杂志２０１５年２月第２５卷第２期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｍｅｄ，Ｆｅｂｒｕａ￣２０１５，Ｖｏ１．２５．Ｎｏ．２　５１　颞肌，将颞肌从颅骨上分离，暴露颅骨后用电钻钻　供血区的血流。如果在缺血后将线栓留动脉血管　内不再拔出，则是永久性缺血模型；如果在缺血一　段时间后将动脉内的线栓完全拔出则为缺血再灌　开颅骨，暴露大脑皮层供血动脉，分离近端动脉，用　电凝或１０—０手术丝线结扎大脑中动脉（ＭＣＡ），造　成脑梗死。在模型的制作过程中如果条件允许应　对股动脉进行分离并插管，定时采集动脉血液对血　气（ｐＯ：，ｐＣＯ　，ｐＨ等．）进行监测，使动物在正常的　生理状况下进行手术。同时使用激光多普勒脑血　注模型。动物的年龄、体重、品系以及线栓的粗细、　材质都严重影响着模型的成功率。作为实验室模　型可重复性的一部分，配合小鼠动脉血管直径选择　包被不同图层厚度的线栓更是十分重要的。虽然　流仪监测脑血流的变化情况，判断脑血流是否下降　到预期值。此方法制作的缺血中风模型一般不可　现在小鼠线栓已经商品化，但仍有不少实验室使用　自制的线栓也取得了很好的稳定性。如果条件允　再灌，不适用于对再灌注损伤的研究。　Ｔａｍｕｒａ－型永久性近端ＭＣＡＯ模型梗死体积取　决于动物的种系，缺血时间以及动物处死的时间，　如果在嗅束水平以上迅速进行ＭＣＡＯ，纹状体动脉　通常不会受累，如果在次级脑动脉水平进行ＭＣＡＯ，　则梗死体积相对较小，但是如果同侧颈内动脉永久　闭塞且对侧颈动脉夹闭１　ｈ，则会增大梗死体积。　Ｔａｍｕｒａ型ＭＣＡＯ的众多优点之一是可以通过　部分颅骨切除来检测到ＭＣＡ区域血管的异常，还可　以在缺血区给大脑减压。因此这个模型脑水肿的　体积比线栓模型要低。大脑水肿可以使用脑内部　的压力（ＩＣＰ）升高，并导致脑内毛细血管灌注下降，　从而进一步提高缺血损伤的体积。小鼠的Ｔａｍｕｒａ　模型的整体的特点为术后死亡率低（Ｏ％到１％）　和重复性高　。术后小鼠可能表现出摄食困难，这　可能是由于部分颅骨切除时造成的颞肌以及下颚　骨损伤造成的，表现为术后体重下降，如果进行长　期研究需要关注动物的营养情况，以免造成不必要　的死亡。　１．２线栓法大脑中动脉闭塞（ＭＣＡＯ）模型　Ｋｏｉｚｕｍ等　在１９８６年首次提出并建立线栓法　ＭＣＡＯ模型首先建立，随后Ｚｅａ　Ｌｏｎｇａ等　一些列　学者对其进行了进一步推广及改进，使其逐渐广为　接受和使用。虽然Ｚｅａ　Ｌｏｎｇａ等使用的是大鼠，但　其手术方法也同样适用于小鼠模型的制作，只是对　于手术者的要求要高很多。其经典术式为：将动物　常规麻醉后仰卧固定，颈部正中切口，分离颈总动　脉（ＣＣＡ）、颈外动脉（ＥＣＡ）和颈内动脉（ＩＣＡ），结　扎ＥＣＡ后，临时阻断ＣＣＡ和ＩＣＡ，将ＥＣＡ结扎处近　心端剪断，使ＥＣＡ游离，使之与ＩＣＡ成一直线。对　尼龙线进行包被，包被材料可以使用硅胶或者多聚　赖氨酸。将包被好的线栓从ＥＣＡ切口处经过ＩＣＡ　进入颅内区域，行进约８—９ｍｍ略感阻力，提示线栓　头部到达大脑前动脉（ＡＣＡ）区域，从而阻断ＭＣＡ　许所有的短暂性脑缺血实验都要通过激光多普勒　血流仪来监测皮层局部脑血流量（ｒＣＢＦ）的变化，以　确认在插入线栓时脑血流下降到预期数值，拔出线　栓后血流恢复，能够在ＭＣＡ区域重新建立脑血流。　小鼠的手术过程较大鼠操作困难，线栓的位置　在不足１　ｍｍ的空间内即可影响模型的最终结果，　故要特别注意插入线栓的深度和手感。首先线栓　的头部要避免进入翼颚动脉（ＰＰＡ）残端，可以在尽　可能靠近ＩＣＡ的地方用１０—０单丝尼龙线结扎翼颚　动脉。线栓的图层材料过厚会阻碍线栓进人ＩＣＡ　的颅内部分或者移动过后海马动脉。这种情况下，　如果线栓停留超过２４　ｈ，可能会导致后海马上部的　损伤，故应选择合适的线栓进行模型制作。．　术后对模型的评价也极为重要，梗塞大脑一侧　半球会影响对侧肢体的活动。因此，如果在皮层右　侧以及尾状核诱导损伤，则小鼠左侧前肢和后肢会　变弱。轻轻的掐尾巴，动物会试图逃离，小鼠会逆　时针方向转圈。如果动物从麻醉状态清醒过来，顺　时针转圈而手术是针对右侧大脑，则有可能是形成　了血肿。这些观察结果加上局部脑血流量读数的　变化可以验证模型是否成功。线栓模型的优势在　于其利用了血管内介人技术进行ＭＣＡ阻断，而不需　要进行部分颅骨切除。目前普遍认为，线栓阻断　ＭＣＡ区供血的方法不开颅、创伤面小，对动物体温、　血压、血气以及缺血损伤引起的水肿和颅内压增高　无明显影响，因此优于开颅法。此外由于线栓　ＭＣＡＯ法再灌注十分方便，因此在研究脑缺血再灌　注损伤中被广泛应用　。这个模型的缺点是脑　水肿的发生率、技术并发症发生率和死亡率稍高。　１．３栓塞法和血栓法ＭＣＡｏ模型　栓塞法和血栓法制作小鼠ＭＣＡＯ模型原理与　线栓法基本相同，均是使用物理手段将ＭＣＡ阻断以　达到使之供血部位缺血的目的，这其中模型成功与　否的关键因素是栓子的制备。栓子的制备材料有　５２　中国比较医学杂志２０１５年２月第２５卷第２期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｎｅｄ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１５，Ｖｏ１．２５．Ｎｏ．２　很多，如空气，碳素颗粒、石蜡以及自体血栓等等，　其中自体血栓制备的血块最普遍¨卜　。但栓塞法　最大的缺点是栓子制备及注入过程中的随机性，无　法预测栓塞的部位和大小。　栓塞法模型制作时除用于堵塞血管的物质外，　手术方法可参见线栓法模型，在ＥＣＡ上剪以斜行的　小口后，插入内装制备好的自体血栓的导管，将导　管经ＩＣＡ插至颅脑底部，随后将血栓顺着导管的走　向注入，即可实现ＭＣＡ供血区的缺血损伤。　Ｔｒａｙｓｔｍａｎ等¨　采用自体血制备的血栓栓子纤维蛋　白可用来制作大鼠ＭＣＡＯ模型。血栓制作过程为：　将动物麻醉后从股动脉抽取动脉血液至内径为０．２　ｍｍ的导管内，导管两端连接充满生理盐水的注射　器轮流向导管加压，使血液在导管内移动凝固，但　并不粘附在导管上，后将导管置于３７摄氏度的水浴　锅中２　ｈ，后移人４摄氏度冰箱中２２　ｈ，使用前将血　栓表面红细胞洗去置于生理盐水中备用即可。为　了更精准的保证高血栓块安置的位置，Ｄｉｎａｐｏｌｉ　等　在多普勒成像技术的指导下借助显微导管输　送栓子进入ＭＣＡ特定部位，成功的建立更为均一的　梗死灶。此类模型的优点是：（１）较接近于人类大　脑栓塞；（２）可测试溶栓药物的作用。缺点：（１）缺　血范围和部位难以预见，再灌过程难以建立；（２）术　中污染诱发感染等炎性反应；（３）严重影响侧支循　环，神经功能评分等分析较差；（３）适用范围窄，仅　适用于一些特殊的研究如溶栓治疗等。　１．４诱导蛛网膜下腔出血的线栓模型　制作蛛网膜下腔出血线栓模型（ＳＡＨ），使用６　—０或者７—０尼龙栓线闭塞Ｗｉｌｌｉｓ环并插人大脑前　动脉，此过程与ＭＣＡＯ模型的制作方法相同。当线　栓前进受到阻力时，再继续插入１　ｍｍ以确保动脉　穿孔，栓线头部刺穿动脉后立即拔出进行再灌。如　果在制作出血模型的过程中持续监测脑血流可以　发现刺破血管后脑血流出现阶梯状下降的特征　图形。　１．５通过注射胶原酶诱导出血性中风模型　血管壁的主要构成成分有蛋白聚糖和多种类　型的胶原。胶原酶可被分为Ｉ～ＶＩＩＩ型，是一类特殊　的金属基质蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒ０ｔｅｉｎａｓｅ，ＭＭＰ）　能够降解细胞外间质以及基底膜中的胶原。Ｉｖ型　和ＶＩＩ型胶原酶广泛用于制备动物的脑出血模型。　胶原酶注入２０ｍｉｎ后即可通过降解脑血管基底膜上　的胶原蛋白造成血管壁的损伤，导致渗血现象的发　生，４小时左右即发展为片状出血。胶原酶使用的　剂量决定了出血区面积的大小。　其手术具体方法为常规麻醉后将小鼠俯卧，头　顶备皮后在正中做１　ｃｍ切口，暴露小鼠颅骨，将小　鼠固定于立体定位仪上，确定其前囟中点，以前囟　为０点，向前０．７　ｍｍ，向右２　ｍｍ处为尾状核于颅骨　投影处，用３２Ｇ针头的１　ｌｘＬ微量注射器刺破入颅　骨４—５　ｍｍ，将计算好剂量的胶原酶（０．１５　Ｕ／ＩｘＬ）　生理盐水溶液０．５　ＩｘＬ缓慢注入即可，注射时间应大　于２０　ｍｉｎ　。胶原酶自身就具有一定的毒性，导　致大脑出血区细胞出现坏死，此外出血区周围的水　肿部位可观察到炎性细胞的浸润。该模型属于渗　出性模型，血肿程度较均一，神经功能缺陷较明显，　成为脑出血研究中广泛应用动物模型之一。　２中风的行为学评估　在临床上，习惯将中风患者的神经功能损伤大　致分为一般功能损伤和局灶性功能损伤。前者反　应的是患者生命状态和整体神经功能，后者反应损　伤造成的定位性功能缺陷，本文将介绍３种国内外　常用的中风后小鼠的行为学评估的标准。分别为　Ｂｅｄｅｒｓｏｎ小鼠行为学评分　１９］，Ｃｌａｋｒ评分小鼠一般　功能损伤评分和Ｃｌａｒｋ评分小鼠局灶功能损伤评　分　。需要注意的是：严重行为缺陷的小鼠容易出　现严重的低温，因此需要持续维持恒温的环境。低　温对短暂性缺血的影响要明显大于对永久性缺血　的影响，另外和大鼠不一样，前臂肢体屈曲不是一　个可靠的小鼠行为学迹象，因此不包括在数据分析　统计中。　以上介绍的３中评价方法各有优缺点，　Ｂｅｄｅｒｓｏｎ评分方法因其简单实用，评价准确而在国　内被广泛应用；Ｃｌａｒｋ评分对多项神经功能进行了较　为全面的评价，操作性好，对动物模型的评价更　具体。　３　总结　在许多种类的动物中都可以成功的重复中风　模型：松鼠猴，沙鼠，兔，猫和狗。作为一个经验法　则，动物物种越大，缺血损伤的大小和定位的差异　性越大。如丰富的大脑侧支循环使得狗很难用于　中风的研究，需要夹闭很多动脉分支才能很好的复　制脑缺血损伤的模型。小动物比如小鼠和大鼠，则　更容易操作，经济性更好而且随时可以得到。另　中国比较医学杂志２０１５年２月第２５卷第２期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃｏｍｐ　Ｍｅｄ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１５，Ｖｏ１．２５．Ｎｏ．２　５３　外，采用廉价、血管解剖近似于人的小鼠为实验对　象还有其他优势，例如脑组织小生化、组化检测费　用低，节约实验耗材等。小鼠的脑中风模型为系统　研究中风的病理生理损伤及各种治疗干预提供了　一ＡＭＰＫ／ｍＴＯＲ　ａｎｄ　ＪＮＫ　ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｅｉ　Ｒｅｓ．２０１４，　９２（１０）：１２９５—３０６．　　ＫＨ，［　。］　Ｌｅｅ　ＳＶ，ＣｈｏｉＣｈｏｉ　ＹＷ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｘａｎｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｍｕｈｉｌｆｏｒｕｍ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｏｕｔｃｏｍｅ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｆｏｃａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｍｅｄ　Ｒｅｐ，　２０１４，９（４）：１４１５—２１．　个重现性好、可控的研究载体。　［１１］　Ｐｒｉｅｔｏ—Ａｒｒｉｂａｓ　Ｒ，Ｍｏｒｅｎｏ－Ｇｕｔｉ６ｒｒｅｚ　Ａ，Ｓｉｍａｌ・Ｈｅｒｎｆｎｄｅｚ　Ｐ，ｅｔ　参考文献：　［１］　Ｍｕｒｒａｙ　ＣＪ，Ｌｏｐｅｚ　ＡＤ．Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｌｏｂａｌ　ｂｕｒｄｅｎ　ｏｆ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．Ｒｅｖ　Ｎｅｕｒｏｌ，　２００８，４７（８）：４１４—４２６．　［Ｊ］．Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ，２０１３，３６９（５）：４４８—４５７．　［２］　Ｋｏｙａｍａ　Ｔ，Ｏｃｈｏａ－Ｃａｌｌｅｊｅｒｏ　Ｌ，Ｓａｋｕｒａｉ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ－ＲＡＭＰ２　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎ　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０１３，　１２７（７）：８４２—５３．　［３］　Ｙｏｓｈｉｚａｗａ　Ｔ，Ｓａｋｕｒａｉ　Ｔ，Ｋａｍｉｙｏｓｈｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｅｌ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｒｄｉａｃ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ａｎｄ　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ－　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ—ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，　２０１３。６１（２）：３４１—５１．　［４］Ｔａｍｕｒａ　Ａ，Ｇｒａｈａｍ　ＤＩ，ＭｃＣｕｌｌｏｃｈ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｆｏｃａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ：１．Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｅａｒｌｙ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｒｅｂ　Ｂｌｏｏｄ　Ｆｌｏｗ　Ｍｅｔａｂ，１９８１，１（１）：５３　—６０．　［５］　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　Ｒ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｒｇｈｔ　ａｎｄ　ｌｅｆｔ　ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｉｃ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ［Ｊ］．　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７９，２０５（４４０７）：７０７—７１０．　［６］　Ｋｏｉｚｕｍｉ　Ｊ，Ｙｏｓｈｉｄａ　Ｙ，Ｎａｋａｚａｗａ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｆ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｅｄｅｍａ：ａ　ｎｅｗ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｅｍｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｒｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｂｅ　ｉｎｔｏｒｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｓｅｈｅｍｉｃ　ａｒｅａ［Ｊ］．Ｊｐｎ　Ｊ　Ｓｔｒｏｋｅ，１９８６，８（１）：１—８．　［７］Ｔｒａｙｓｔｍａｎ　ＲＪ．Ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｆｏｃａｌ　ａｎｄ　ｇｌｏｂａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．ＩＬＡＲ　Ｊ，２００３，４４（２）：８５—９５．　［８］Ｎａｋａｎｏ　Ｙ，Ｓｕｚｕｋｉ　Ｙ，Ｔａｋａｇｉ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．．Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｎｏｎｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｍｅｌａｎｏｍａ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｂ（ＧＰＮＭＢ）ａｓ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｆｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ　［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４，２６（２７７）：１２３—１３１．　【９］Ｇｕｏ　Ｚ１，Ｃａｏ　Ｇ，Ｙａｎｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｕｔｏｐｈａｇｙ　ａｎｄ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　［１２］　Ｙａｎｇ　Ｙ，Ｙａｎｇ　Ｔ，Ｌｉ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｅｗ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ｆｏｃａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｍｏｄｅｌ　ｂｙ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ０ｌｙｖｉｎｙｌｓｉｌ０ｘａｎｅ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ：ａ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００２，１１８（２）：１９９—２０６．　［１３］　Ｔｏｓｈｉｍａ　Ｙ，Ｓａｔｏｈ　Ｓ，Ｉｋｅｇａｋｉ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｅｗ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｃｅｒｅｂｒａｌ－　ｍｉｃｒｏｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｅｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａ　Ｒｈｏ－　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，２０００，３１（９）：２２４５—２２５０．　［１４］　姚国杰，马廉亭，吴佐泉．经颈内动脉内注入真丝线段建立　大鼠局灶性脑梗死模型［Ｊ］．中国临床康复，２００３，７（３）：　３９７—４１７．　［１５］　李建生，刘敬霞，于海滨．大鼠自体血栓结合线栓阻塞大脑　中动脉制备脑缺血模型的建立与评价［Ｊ］．中国危重病急救　医学，２００６，１８（５）：２７２—２７４．　［１６］　Ｔｒａｙｓｔｍａｎ　ＲＪ．Ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｆｏｃａｌ　ａｎｄ　ｇｌｏｂａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ［Ｊ］．ＩＬＡＲ　Ｊ，２００３，４４（２）：８５—９５．　［１７］　Ｄｉｎａｐｏｌｉ　ＶＡ，Ｒｏｓｅｎ　ＣＬ，Ｎａｇａｍｉｎｅ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ＭＣＡ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ：ａ　ｐｒｅｃｉｓｅ　ｅｍｂｏｌｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ　ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００６，１５４（１—２）：２３３—２３８．　［１８］　Ｚｈｕ　Ｗ，Ｇａｏ　Ｙ，Ｃｈａｎｇ　ＣＦ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ　ｉｎ　ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ，ｃｏｒｔｅｘ，ａｎｄ　ｈｉｐｐｏｅａｍｐｕｓ　ｂｙ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ　ｂｌｏｏｄ　ｏｒ　ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　ＯＮＥ，２０１４，９　（５）：ｅ９７４２３．　［１９］　Ｒｉｄｅｎｏｕｒ　ＴＲ，Ｗａｒｎｅｒ　ＤＳ，Ｔｏｄｄ　ＭＭ，ｅｔ　ａ１．Ｍｉｌｄ　ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ　ｒｅｄｕｃｅｓ　ｉｎｆａｒｃｔ　ｓｉｚｅ　ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｔｅｍｐｏｒａｒｙ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｐｅｒｍａｎｅｎｔ　ｆｏｃａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，１９９２，２３（５）：７３３—７３８．　［２Ｏ］　Ｃｌａｒｋ　ＷＭ，Ｌｅｓｓｏｖ　ＮＳ，Ｄｉｘｏｎ　ＭＰ，ｅｔ　ａ１．　Ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ　ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ　ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ［Ｊ］．　Ｎｅｕｒｏｌ　ｒｅｓ，１９９７，１９（６）：４１—６４８．　［修回日期］２０１４－１０－２７