消瘀片对高脂小鼠降血脂的时效关系研究

消瘀片对高脂小鼠降血脂的时效关系研究

谢梅林　顾振纶　(苏州中药研究所　苏州215007)

陈可冀　(中国中医研究院西苑医院　北京100091)

周文轩　郭次仪　(香港保健协会)

3

摘要　目的:观察消瘀片降低高脂小鼠血脂的时效关系。方法:腹腔注射75%蛋黄乳液复制高血脂小鼠模型,然后测定灌服消瘀片0.35～1.4g/kg后不同时间的小鼠血脂水平。结果:高血脂小鼠单次给予消瘀片后分别可使血清TC,TG和LDL2C降低1,1～3,5h,其中降低LDL2C的作用最强,维持时间最长,但未见对HDL2C,apoAI和apoB有明显的影响。结论:小鼠单次灌服消瘀片对降低血清TC,TG和LDL2C的持续时间是不同的。关键词　消瘀片　降血脂作用　时效关系　　消瘀片系苏州中药研究所与香港百草堂有限公司联合研制的纯中药降血脂制剂,主要成

分为丹参和山楂。我们的实验已证明它可预防和治疗高脂膳食大鼠或兔的血脂升高[1],本文采用蛋黄型高血脂小鼠模型[2],观察1次给予消瘀片后不同时间对小鼠血脂,脂蛋白和载脂蛋白的影响,为临床确定最佳给药时间方案提供实验依据。1　实验材料

消瘀片为棕褐色粉末,系太平保健药业(蛇口)有限公司提供,临用时用蒸馏水配至所需浓度。力平脂为法国科尼大药厂产品。蛋黄为新鲜鸡蛋去蛋白后加双蒸水至75%乳液。血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白2胆固醇(HDL2C)测定试剂盒均由东鸥生物工程公司提供。载脂蛋白AI(apoAI)和B(apoB)测定试剂盒由上海北海生物技术工程有限公司供应。雄性昆明种小鼠体重为20～23g,由苏州医学院实验动物中心提供。721型和752C型分光光度计,为上海第三分析仪品厂产品。2　实验方法与结果2.1　实验方法

正常对照组和高脂模型组各50只,消瘀片小、中、大剂量组和力平脂组各40只。除正常对照

组外,其余小鼠ip75%蛋黄乳液0.1ml/10g,20h时从正常对照组和高脂模型组中各取10只小鼠,由眼眶静脉丛取血(禁食12h,下同),按试剂盒方法测定TC,TG,apoAI,apoB和HDL2C含量,按公式低密度脂蛋白2胆固醇(LDL2C)=TC-(1/2.2TG+HDL2C)计算LDL2C含量作为给药后0h的水平,余下小鼠ig

蒸馏水,消瘀片小、中、大剂量组小鼠分别ig0.35,0.7,1.4g/kg的消瘀片,力平脂组小鼠ig50mg/kg的力平脂,灌胃量均为0.1ml/10g,然

后分别在给药后1,3,5,7h从每组中取出10只小鼠取血测定血清TC,TG,apoAI,apoB,HDL2C和LDL2C的含量。2.2　对血清TC的影响由表1可见,高脂模型组小鼠在给药后各个时间的血清TC均高于正常对照组(P<0.05或P<0.01),而给消瘀片1h后小鼠血清TC,尤其是中、大剂量组较高脂模型组明显降低,(P<0.05),但1h后又回复至原来高TC水平。

　　3香港保健协会资助项目

取雄性昆明种小鼠260只,随机分为6组。

　中国中药杂志　1999年第24卷第4期　

・229・

表1　消瘀片对高血脂小鼠血清总胆固醇含量的影响

组别

0h

1h1.9±0.4

2)

mmol/L

给药后血清TC含量

3h2.3±0.3

2)

5h2.0±0.6

1)

7h2.2±0.3

2)

正常对照组

高脂模型组力平脂组消瘀片小剂量组消瘀片中剂量组消瘀片大剂量组

2.0±0.73.5±0.9

4.0±0.53.5±0.73.5±0.4

3.8±0.84.0±0.83.8±0.83.4±0.93.9±0.4

2.9±0.63.1±0.73.3±0.53.2±0.92.9±1.0

2.9±0.71)3.4±0.83.1±0.73.1±0.83.2±0.6

3.0±0.64)

3)

3.4±0.63)

1)2)3)4)

　　注:①x±s　②n=10　③与正常对照组比　P<0.05　P<0.01　④与高脂模型组比　P<0.05　P<0.01(下同)

2.3　对血清TG的影响0.01),给予消瘀片后1h即可使高血脂小鼠血由表2可见,高脂模型组小鼠在给药后各个时间的血清TG均显著高于正常对照组(P<清TG含量明显下降(P<0.05),大剂量组的作用更为明显,可维持3h。mmol/L

给药后血清TG含量表2　消瘀片对高血脂小鼠血清甘油三酯含量的影响组别

0h1h0.69±0.172.84±0.902)2.05±0.413)2.13±0.513)2.00±0.682.06±0.56

3)3)

3h

0.77±0.172.70±1.032)2.13±0.802.51±0.861.90±1.241.89±0.553)

5h

0.70±0.161.43±0.582)1.51±0.411.40±0.271.22±0.481.03±0.34

7h

0.73±0.181.04±0.242)1.57±0.663)1.10±0.251.18±0.661.25±0.47

正常对照组高脂模型组力平脂组消瘀片小剂量组消瘀片中剂量组消瘀片大剂量组

0.91±0.342.73±0.972)

2.4　对血清LDL2C的影响1h可见明显降低(P<0.05或P<0.01),至5h

由表3可见,高脂模型组小鼠在给药后5h的血清LDL2C均显著高于正常对照组(P<0.01),而给消瘀片小鼠血清LDL2C在给药后

时降至最低,但7h时反跳至高于高脂模型组水平(P<0.01)。

mmol/L

表3　消瘀片对高血脂小鼠血清LDL2C含量的影响

组别

0h

1h

0.13±0.22

2)

给药后血清LDL2C含量

3h

0.25±0.30

2)

5h

0.23±0.24

2)

7h

0.18±0.26

2)

正常对照组

高脂模型组力平脂组消瘀片小剂量组消瘀片中剂量组消瘀片大剂量组

0.14±0.190.91±0.41

1.45±0.470.90±0.63

0.64±0.484)

3)

1.33±0.44

1.10±0.360.90±0.44

0.68±0.35

0.59±0.350.16±0.12

0.30±0.260.31±0.340.87±0.354)0.72±0.524)0.57±0.234)

3)4)

0.74±0.424)0.76±0.444)

0.75±0.523)0.80±0.324)

0.18±0.064)0.14±0.204)

2.5　对血清HDL2C和apoAI的影响3　讨论

给消瘀片后,未见对高血脂小鼠血清HDL2

C和apoAI有明显的影响(表4,5)。2.6　对血清apoB的影响

由表6可见,高脂模型组小鼠血清apoB含量在给药后的各个时间均显著高于正常对照组(P<0.01),给消瘀片后3～5h,虽可见血清apoB含量有一定下降趋势,但与高脂模型组相比较未见有明显差异。・230・

小鼠1次ip75%蛋黄乳液后可使血清TC明显升高[2～4],本文结果显示此模型同时可使血清TG,LDL2C和apoB含量明显增加,而apoAI降低,呈现典型的脂质代谢紊乱模型。因此作者认为,作为降血脂药的初筛方法,可初步了解被试药物对血脂、脂蛋白和载脂蛋白的影响,值得推广应用。

　中国中药杂志　1999年第24卷第4期　

表4　消瘀片对高血脂小鼠血清HDL2C含量的影响

组别

0h

1h1.7±0.42.1±0.42.0±0.52.0±0.42.4±0.32.4±0.4

1)

mmol/L

给药后血清HDL2C含量

3h1.9±0.32.0±0.52.2±0.42.2±0.52.1±0.52.5±0.43)

5h1.8±0.32.4±0.42.3±0.42.7±0.42.9±0.92.6±0.5

2)

7h2.1±0.52.3±0.60.9±0.82.0±0.62.0±0.42.3±0.6

正常对照组

高脂模型组力平脂组消瘀片小剂量组消瘀片中剂量组消瘀片大剂量组

1.7±0.62.1±0.6

表5　消瘀片对高血脂小鼠血清载脂蛋白AI含量的影响

组别

0h

1h

0.190±0.0500.081±0.0190.065±0.0250.083±0.0220.068±0.0240.114±0.050

2)

g/L

给药后血清apoAI含量

3h

0.185±0.0430.156±0.0310.445±0.2120.155±0.0620.146±0.0850.204±0.097

3)

5h0.188±0.1280.088±0.0370.092±0.0250.126±0.0450.129±0.0500.110±0.023

1)

7h

0.139±0.0620.138±0.0430.157±0.0420.174±0.0360.165±0.0560.160±0.030

正常对照组

高脂模型组力平脂组消瘀片小剂量组消瘀片中剂量组消瘀片大剂量组0.090±0.0280.119±0.054

　　　　表6　消瘀片对高血脂小鼠血清载脂蛋白B含量的影响

组别

0h

1h

0.19±0.06

2)

g/L

给药后apoB

3h

0.14±0.04

2)

5h

0.14±0.06

2)

7h

0.10±0.05

2)

正常对照组

高脂模型组力平脂组消瘀片小剂量组消瘀片中剂量组消瘀片大剂量组

0.13±0.050.31±0.11

0.32±0.070.26±0.050.31±0.080.34±0.100.32±0.06

0.28±0.080.30±0.060.25±0.100.23±0.050.27±0.07

0.22±0.070.23±0.040.21±0.040.22±0.070.17±0.06

0.17±0.042)0.24±0.083)

0.21±0.080.21±0.070.22±0.07

　　本文研究结果表明,单次给消瘀片1h后可使蛋黄型高血脂小鼠血清TC和TG含量明显下降,大剂量组降低血清TG的作用可持续3h,提示消瘀片具有良好的降血脂作用。

消瘀片主要由丹参和山楂提取物组成,文献报道丹参及其有效成分丹参素在体外细胞膜模型上具有抑制内源性胆固醇合成[5],给豚鼠连服3周山楂水煎剂后可使肝细胞微粒体及小肠粘膜中胆固醇合成限速酶羟甲戊二酰辅酶A还原酶活性分别下降70%和67%[6],山楂核醇提取物降低鹌鹑血清TC也认为是由于抑制肝胆固醇合成所致[7],本实验所采用的蛋黄型高血脂模型,其形成机理是外源性胆固醇的迅速吸收或肝胆固醇的合成加速[2],因而我们推测消瘀片可能主要也是通过抑制肝脏胆固醇的合成而发挥降血脂效应。

　中国中药杂志　1999年第24卷第4期　

消瘀片在降低血清TC和TG的同时,可使

小鼠血清apoB含量有所下降,LDL2C含量明显降低,且可维持5h,但未见对血清HDL2C和apoAI含量有明显影响。有人报道丹参能诱导高脂膳食大鼠肝LDL受体mRNA的高表达,而对apoAImRNA表达无明显影响[8],根据我们的实验结果,推测消瘀片对小鼠有相类似的作用。但消瘀片降低高血脂小鼠血清TC,TG和LDL2C的持续时间各不相同,而且我们还发现,给消瘀片7h后小鼠血清LDL2C水平高于高脂模型组,这与连续给药的实验结果并不一致[1],是否与单次给药后未能达到稳态血药浓度有关,尚有待于深入研究。4　参考文献

1　谢梅林,顾振纶,陈可冀,等.消瘀片降血脂作用研究.中草

药,1998,29(3):178

2　凌树森,张菊,孙维林.小鼠高胆固醇血症快速造型法的研

・231・

究.药学通报,1985,70(1):15

3　包照日格图,吴恩.荜茇油非皂化物对小鼠胆固醇代谢的影

醇代谢的影响.中西医结合杂志,1987,7(8):483

7　褚衍芳,黄文兴.山楂核醇提取物对鹌鹑血清和动脉壁胆固

响.中国药理学通报,1991,7(6):463

4　黄能慧,李诚秀,任光友,等.甘草酸降血脂作用的实验研

醇水平的影响.中草药,1988,19(1):25

8　姜传仓,蔡海江,范乐明,等.丹参对LDL受体及apoAImR2NA水平的影响.南京医科大学学报,1994,14(4):522

究.贵阳医学院学报,1994,19(4):333

5　孙锡铭,蔡海江,宋素云,等.丹参素的新的药理作用.中草

　　致谢　苏州中药研究所陆群和朱路佳同志参加实

药,1991,22(1):22

6　王树立,李永德,赵勤,等.山楂、黄芪及刺五加对豚鼠胆固

验操作。

1997208208收稿

化痰愈心汤及功能药组对

453大鼠主动脉Ca内流的影响莫尚武　刘宁　金建南(四川大学原子核科学技术研究所　成都610064)

丁伟璜　阮小燕　卿怀乐

(四川省中医药研究院　成都610041)

摘要　目的:探索中药复方化痰愈心汤及功能药组的钙拮抗作用。方法:用45Ca跨膜技术测量大鼠主动脉3种钙通道的Ca2+内流影响。结果:当复方浓度为0.5～5mg/ml时,能阻滞大鼠主动脉ROC和

PDC的Ca2+内流;功能药组的钙拮抗作用以活血组和行气组较好。结论:化痰愈心汤治疗冠心病的机

理可能与阻滞细胞膜外Ca2+内流有关,其作用规律与Verapamil相似。

关键词　中药复方　钙拮抗剂　同位素45Ca

　　细胞外的钙离子大量流入心血管细胞被认

为是冠心病发病的重要原因之一。用钙拮抗药物阻滞钙离子内流是西医临床常用的治疗方法[1]。随着西药钙拮抗剂药物研究的不断深入,中药钙拮抗剂研究近年来发展很快[2～4],但有关中药复方的钙拮抗作用研究目前还不多。化痰愈心汤是著名中医药专家邓铁涛教授治疗冠心病的有效方剂,其治病机理是否与阻滞细胞膜钙内流有关,尚未见报道。本实验用核技术与生物技术相结合的45Ca跨膜流动测定方法,测定了全方及各功能药组对大鼠主动脉3种钙通道的阻滞作用,对探索复方治病机理及研究高活性中药钙拮抗剂药物有一定的意义。1　材料和方法1.1　中药提取方法

化痰愈心汤由法半夏9g、云茯苓12g、竹茹9g、橘红4.5g、枳壳4.5g、党参15g、丹参12g、・232・

甘草4.5g8味中药组成,按中药理论可分为6

个功能药组:化痰、活血、行气、补气、化湿、其它组。按总方比例备齐各功能组药材,然后分别水煎提取3次,每次煮沸20min,合并3次滤液,浓缩成每毫升含生药0.5g备用。1.2　实验方法

45　　Ca跨膜流动测定方法按文献[5,6]并加以

μ改进。吸取不同浓度的中药提取液20l分别加至45Ca2PSS液、含45Ca的高钾溶液和含NE

的45Ca2PSS液中。Verapamil的钙拮抗作用测

45

定方法与中药提取液相同。Ca的内流用以下公式计算:Ca2+内流量(μmol/kg)=组织(dpm)/组织湿重(kg)×溶液中Ca2+浓度(μmol/L)/溶液中dpm/L。

　3国家自然科学基金资助项目并得到国家教委辐射物理及技术开放实验室的资助

　中国中药杂志　1999年第24卷第4期