货号: QS2102 规格：50管/48样
琥珀酸脱氢酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。
测定原理：
SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP的还原速度，代表SDH酶活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存； 试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存； 试剂三：1mL×1支，-20℃保存； 试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存； 试剂六：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂4℃保存。 样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
① 称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆
器或研钵匀浆。
② 将匀浆600g，4℃离心5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。 ④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的SDH（此步可选做）。
在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体SDH活性测定。 测定步骤和加样表： 试剂名称（μL） 测定管 试剂四 60 试剂五 30 蒸馏水 800 37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min左右
样本 30 第1页，共2页
试剂六 30 用蒸馏水调零后，依次加各试剂到1 mL玻璃比色皿中，在加入试剂六的同时开始计时，混匀，在600 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和1分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。 SDH活性的计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。 SDH活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T=1508×ΔA÷Cpr （2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
SDH活性（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=304.6×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。
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SDH活性（nmol/min /10 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.609×ΔA
V反总：反应体系总体积，9.5×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.03 mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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