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林可霉素的发酵及生物效价测定

来源:飒榕旅游知识分享网


微生物发酵即是指利用微生物,在适宜的条件下,将原料经过特定的代谢途径转化为人类所需要的产物的过程,微生物发酵生产水平主要取决于菌种本身的遗传特性和培养条件

林可霉素(Lincomycin)是一类具有重要临床意义的高效抗生素,是美国普强公司的Manson等人于1962年首先从美国内布拉斯加州林肯市附近土壤中分离得到的一种由林可链霉菌所产生的抗生素,主要对革兰氏阳性菌有效,特别是对金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等有良好抑菌作用,对革兰氏阴性菌亦有一定的抑制作用。

林可霉素的作用机制是通过与核糖体50S亚基23S rRNA的中心环相结合而抑制蛋白质生物合成过程中的转移定位,因此通过影响蛋白质的合成抑制细菌生长。

抗生素抗菌物质的含量称效价。抗生素效价测定有化学法或生物法。生物法就是将抗生素溶液,在含有敏感试验菌的琼脂培养基上进行扩散渗透,经过一定时间后,抗生素扩散到适当的范围,产生透明的抑菌圈。

抑菌圈的直径与抗生素总量、抗生素的扩散系数、扩散时间、培养基的厚度和最低抑菌浓度等因素有关。抗生素总量的对数和抑菌圈直径的平方呈直线关系。因此,抗生素效价可以由抑菌圈的大小来衡量.

将已知效价的林可霉素标准液先制成标准曲线,比较已知效价标准液与未知效价的被检品溶液的抑菌圈的大小,算出样品中林可霉素的效价。

菌种:林可链霉菌(林可霉素产生菌)

藤黄八叠球菌(林可霉素指示菌)

培养基:种子培养基TSBY(30ml)、发酵培养基YMG (30ml)、指示菌培养皿YMG

器皿:三角瓶 、容量瓶、恒温摇床、离心机、恒温培养箱、灭菌锅等

主要试剂:5 mol/L NaOH等

1. 发酵前工作:

培养基、试剂的配制;包培养皿、枪头等。灭菌工作。

2. 发酵培养

(1) 将菌种接至固体培养基,30℃培养7天放冰箱0℃-8℃保存备用

(2) 从固体培养基上挖1cm×1cm正方块,接入装有已灭菌发酵培养的摇瓶内,放入摇床(30℃,220r/min)摇瓶2天观察菌丝形态,测菌丝浓度和培养液pH

(3) 接摇瓶菌丝体3ml于已灭菌的带有30ml发酵培养基的250ml摇瓶中,发酵5-6天,在发酵过程中定时测菌丝浓度,观察菌丝形态

3. 生物效价的测定

(1) 藤黄八叠球菌液的制备

取每周接种一次,用普通琼脂斜面保存的藤黄八叠球菌,在实验前一日,将细菌接种于盛有种子培养基的试管斜面上,于28℃培养24小时后,用无菌水5ml将菌洗下

(2) 标准曲线的绘制

取2 ml EP管5只编号,并向各瓶分别加入不同量的100 μg/ml的标准品溶液,用水稀释至刻度,使成每ml含林可霉素2、12、22、32、42 μg 5种浓度的标准品稀释液

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