培养基和组别一样,培养基是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等。
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培养基和组别一样吗
培养基和组别一样吗?答:培养基和组别一样。
培养基是怎么分类的啊
化学分类:
1、天然培养基
天然培养基是指一类利用动物、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。例如。牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基和LB培养基等。
常用的天然有机营养物质包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培养基成本较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。
2、组合培养基
合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计而配制的培养基。例如。高氏1号培养基和查氏培养基等。
合成培养基有一定的配方,配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其成本较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。
3、半组合培养基
指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如,马铃薯蔗糖培养基。
物理分类:
1、液体培养基
80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。
2、固体培养基
一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。
3、半固体培养基
指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。
4、脱水培养基
又称预制干燥培养基,指含有除水分外的一切成分的商品培养基。
微生物分类:
1、选择性培养基:一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基,具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能,广泛用于菌种筛选等领域。
2、鉴别培养基:一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便的从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。例如,伊红美蓝乳糖培养基(EMB)。
扩展资料:
培养基的配置原则:
1、选择适宜的营养物质
总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
2、营养物质浓度及配比合适
培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用,例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑菌或杀菌作用。
3、控制pH条件
培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。
4、控制氧化还原电位(redox potential)
不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。
5、原料来源的选择
在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。
6、灭菌处理
要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。
参考资料来源:百度百科——培养基
植物细胞培养与植物组织培养有什么区别和联系?他们所用的培养基有神马不同 他们的培养基状态一样吗?
区别是一个是利用单个细胞培育,而一个是用离体组织外植体培养.联系就是原理都是细胞全能性.只是起点不一样.培养基没有什么区别.都是MS培养基.
植物组织培养,每种植物的培养基配方能一样的吗?
组织培养是一种无性繁殖技术,由于组织的种属不同、组织细胞内渗透压不同等等,所以选择的培养基也就不同。如果想做组织培养,建议先从组织的生理学学起,了解生理特性,希望对你有帮助。
培养基的配制
培养基的配制:
1、称量和熬煮
按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
2、加热溶解
把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
3、分装
按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
4、加棉塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
5、包扎
加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
培养基配制注意事项:
1、培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。
2、PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
3、调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
4、培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。
5、培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.2g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性。
扩展资料
培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基。
根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等。
根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。
培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,最好现配现用。
参考资料:百度百科-培养基
人工培养基和组织培养一样吗
不一祥,组织培养是一种方法,人工培养基可以看成是一种营养液。
组织培养即植物无菌培养技术,是根据植物细胞具有全能性的理论,利用植物体离体的器官、组织或细胞,如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下,能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,最后形成完整的植株。至今,世界各国在无性系繁殖、花卉育种、植株脱病毒和种质保存等方面,广泛应用组织培养技术。
植物细胞培养与植物组织培养有什么区别和联系?他们所用的培养基有神马不同
区别是一个是利用单个细胞培育,而一个是用离体组织外植体培养。联系就是原理都是细胞全能性。只是起点不一样。培养基没有什么区别。都是MS培养基。
植物组培实验室常用的培养基有哪几种类型
1、常用的培养基
自1937年White建立第一个植物组织培养培养基以来,许多研究者报道了各种培养基,其数量很多,配方各异。根据营养水平不同,培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基也就是通常所说的培养基,主要有MS、White、B5、N6、改良MS、Nitsh、Miller、SH等,其配方见植物组织培养常用培养基配方表。完全培养基是在基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质。如植物生长调节物质和其他复杂有机新增物等。
2、几种常用基本培养基的特点
(1)MS培养基
1962年Murashige和Skoog为培养菸草组织时设计的,是目前应用最广泛的一种培养基。其特点是无机盐浓度高,具有高含量的氮、钾,尤其是铵盐和盐的含量很大,能够满足迅速增长的组织对营养元素的需求,有加速愈伤组织和培养物生长的作用,当培养物久不转移时仍可维持其生存。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求比较低的植物,尤其不适合铵盐过高易发生毒害的植物。
与MS培养基基本成分较为接近的还有LS、RM培养基,LS培养基去掉了甘氨酸、盐酸吡哆醇和烟酸;RM培养基把铵的含量提高到4950mg/L,磷酸二氢钾提高到510 mg/L。
(2)White培养基
1943年由White设计的,1963年做了改良。这是一个低盐浓度培养基,它的使用也很广泛,无论是对生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。
(3)N6培养基
1974年由我国朱至清等学者为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是KNO3和(NH4)2SO4含量高,不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养。
(4)B5培养基
1968年由Camborh等设计的。它的主要特点是含有较低的铵盐,较高的盐和盐酸硫胺素。铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用,但它适合于某些双子叶植物特别是木本植物的生长。
(5)SH培养基
1972年由SchenkHid和Hidebrandt设计的。它的主要特点与B5相似,不用(NH4)2SO4,而改用NH4H2PO4,是无机盐浓度较高的培养基。在不少单子叶和双子叶植物上使用,效果很好。
(6)Miller培养基
与MS培养基比较,Miller培养基无机元素用量减少1/3~1/2,微量元素种类减少。无肌醇。
(7)VW培养基
1949年由Vacin和Went设计,适合于气生兰的培养。总的离子强度稍低些,磷以磷酸钙形式供给,要先用1mol/L HCl溶解后再加入混合溶液中。
一般大肠杆菌都使用LB 培养基。
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
植物组培常用培养基如下
MS(Murashige & Skoog)培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。
B5培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好,而另一些植物,在B5培养基上更适宜。
N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养。
怀特(While)培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。
植物组培可能都不一样,最好是说清楚是哪个植物。我是做水稻的。用的有
诱导培养培养基(NBD) NB①+2,4-D 2 mg/L+ Gelrite 2.8 g/L,pH 5.8
继代培养培养基(NBD) 同诱导培养培养基
共培养培养基I(NBCI) NB+2,4-D 2 mg/L + 乙酰丁香酮(As)100 μmol/L,pH5.5
共培养培养基Ⅱ(NBCⅡ)NBCI+Gelrite 2.8 g/L,pH5.5
选择培养基I(NBSI)NBD+头孢霉素500 mg/L+潮霉素B 50 mg/L,pH 5.8
选择培养基Ⅱ(NBSⅡ)NBD+头孢霉素400 mg/L+潮霉素B 50 mg/L,pH 5.8
分化培养基(RM) NB+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg /L+KT4.0 mg/L+头孢霉素300 mg/L+潮霉素B 50 mg/L+Gelrite 3.5 g/L,pH 5.8
生根培养基(ShM) 1/2 NB无机盐+蔗糖15 g/L+ Agar7 g/L,pH 5.8
其中① NB:N6大量+ MS铁盐+ B5微量+B5有机+水解酪蛋白0.5 g/L+谷氨酰胺0.5 g/L+脯氨酸0.5 g/L+蔗糖30 g/L
植物组织培养培养基的五类成分
1.无机营养物 无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成,大量元素中,氮源通常有硝态氮或铵态氮,但在培养基中用硝态氮的较多,也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子,在近代的培养基中,其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物,由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子,大多以螯合铁的形式存在,即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源 培养的植物组织或细胞,它们的光合作用较弱。因此,需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素 在培养基中加入维生素,常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素,其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物 包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外,琼脂也是最常用的有机附加物,它主要是作为培养基的支援物,使培养基呈固体状态,以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质 常用的生长调节物质大致包括以下三类: (1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)。 (2)细胞素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。 (3)赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸(GA3)。
这个现在很多植物都会用的,一般组培都用这个,只是比例不同而已,有可能用的是二分之一MS培养基。
我们的拟南芥、菸草、牡丹用的都是MS培养基,针对不同的植物可以搜论文,看看他们采用的是哪一种组培培养基,培养基其实不是最关键的,最关键的是培养基里面激素的比例。
培养基种类繁多,根据其成分、物理状态和用途可将培养基分成多种型别。
(一)按成分不同划分
1、天然 培养基 (plex medium) 这类培养基含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物,也称非化学限定培养基(chemically undefined medium)。牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。基因克隆技术中常用的LB(Luria—Bertani)培养基也是一种天然培养基,其组成见表5.9。
牛肉浸膏、蛋白胨及酵母浸膏的来源及主要成分
营养物质 牛肉浸膏
来 源 瘦牛肉组织浸出汁浓缩而成的膏状物质
主要成分 富含水溶性糖类、有机氮化合物、维生素、盐等
营养物质 蛋白胨
来 源 将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成
主要成分 富含有机氮化合物、也含有一些维生素和糖类的粉末状物质
营养物质 酵母浸膏
来 源 酵母细胞的水溶性提取物浓缩而成的膏状物质
主要成分 富含B类维生素,也含有有机氮化合物和糖类
常用的天然有机营养物质包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏(表5.10)、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡萝卜汁、椰子汁等,嗜粪微生物(coprophilous microani *** s)可以利用粪水作为营养物质。天然培养基成本较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。
2、合成培养基(synthic medium)是由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基,也称化学限定培养基(chemically defined medium),高氏I号培养基和查氏培养基就属于此种类型。配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其成本较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微 生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。
(二)根据物理状态划分
根据培养基中凝固剂的有无及含量的多少,可将培养基划分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基三种类型。
1、固体培养基(so1id medium)
在液体培养基中加入一定量凝固剂,使其成为固体状态即为固体培养基。理想的凝固剂应具备以下条件:①不被所培养的微生物分解利用;②在微生物生长的温度范围内保持固体状态,在培养嗜热细菌时,由于高温容易引起培养基液化,通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题;③凝固剂凝固点温度不能太低,否则将不利于微生物的生长;④凝固剂对所培养的微生物无毒害作用;⑤凝固剂在灭菌过程中不会被破坏;⑥透明度好,粘着力强;⑦配制方便且价格低廉。常用的凝固剂有琼脂(agar)、明胶(gelatain)和矽胶(silica gel)。表5.11列出琼脂和明胶的一些主要特征。
对绝大多数微生物而言,琼脂是最理想的凝固剂,琼脂是由藻类(海产石花菜)中提取的一种高度分支的复杂多糖;明胶是由胶原蛋白制备得到的产物,是最早用来作为凝固剂的物质,但由于其凝固点太低,而且某些细菌和许多真菌产生的非特异性胞外蛋白酶以及梭菌产生的特异性胶原酶都能液化明胶,目前已较少作为凝固剂;矽胶是由无机的矽酸钠(Na2SO3)及矽酸钾(K2SiO3)被盐酸及硫酸中和时凝聚而成的胶体,它不含有机物,适合配制分离与培养自养型微生物的培养基。
用葡萄糖、氯化钠配制的微生物培养基就是营养最全面的全营养培养基、牛肉浸粉(或浸膏)、蛋白胨 ,也可以加入琼脂制成固体或半固体培养基营养成分越全面。绝大多数细菌都可以在这种培养基中生长,能够生长的细菌也越多。可以是液体培养基
细菌一般采用牛肉膏蛋白胨培养基或LB 培养基:
牛肉膏蛋白胨培养基:
牛肉膏 5g/L
蛋白胨 10g/L
氯化钠 5g/L
pH7.0-7.2
LB培养基:
酵母粉 5g/L
蛋白胨 10g/L
氯化钠 10g/L
pH7.0-7.2
PCA啊,平板计数琼脂培养基。我们培养细菌主要是从食品中拿出点作为样本,用培养基培养细菌从而反应食品污染及安全程度。
发酵培养基的要求?配制培养基时应注意哪些问题
1. 明确培养基的配制原理。
2. 掌握配制培养基的一般方法和步骤。
学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物培养基的配制。
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
各类微生物对营养的要求不尽相同,因而培养基的种类繁多。培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基,培养放线菌常用高氏I号培养基,培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基,培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。另外还有固体、液体、加富、选择、鉴别等培养基之分。在这些培养基中,就营养物质而言,一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物,一般不为微生物所利用。它在96℃以上熔化成液体,而在45℃左右开始凝固成固体。在配制培养基时,根据各类微生物的特点,就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。
培养基除了满足微生物所必需营养物质外,还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的pH偏酸;细菌、放线菌的pH为微碱性。所以每次配制培养基时,都要将培养基的pH值调到一定的范围。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏 3.0 g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
高氏I号培养基配方
可溶性淀粉 20g
NaCl 0.5g
KNO3 1g
K2HPO4•3H2O 0.5g
MgSO4•7H2O 0.5g
FeSO4•7H2O 0.01g
琼脂 15—25g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
马铃薯培养基配方
马铃薯(去皮) 200g
葡萄糖(或蔗糖) 20g
琼脂 15~25g
水 1000ml
自然pH
察氏培养基配方
蔗糖 30g
NaNO3 2g
K2HPO4 1g
KCl 0.5g
MgSO4•7H2O 0.5g
FeSO4•7H2O 0.01g
琼脂 15~25g
蒸馏水 1000ml
自然pH
实验器材
牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,1mol/LNaOH, 1mol/LHCl,KNO3,K2HPO4•3H2O,MgSO4•7H2O,FeS04•7H2O,马铃薯,蔗糖等。
试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,天平,牛角匙, pH试纸(pH 5.5~9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。
实验步骤
1.牛肉膏蛋白胨培养基配制方法
(1) 称量:按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCL放人烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯,也可按在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸湿,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净,擦干,再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。
(2) 溶化:在上述烧杯中先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后,补充水到所需的总体积,如果配制固体培养基时,将称好的琼脂放入己溶的药品中,再加热溶化,最后补足所损失的水分。
在琼脂溶化过程中,应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器。同时.需不断搅拌.以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时,不可用铜或铁锅加热溶化,以免离子进入培养基中,影晌细菌生长。
(3) 调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,如果偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。反之,用mol/LHCL进行调节。
对于有些要求pH较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行。
pH不要调过头,以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时,若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌,则琼脂因水解不能凝固。因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌,再调整PH。
(4) 过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利某些实验结果的观察。一般无特殊要求的情况下可以省去(本实验勿需过滤)。
(5) 分装
按实验要求,可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。
1) 液体分装:分装高度以试管高度的l/4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的一半为宜,如果是用于振荡培养用,则根据通气量的要求酌情减少;有的液体培养基在灭菌后,需要补加一定量的其他无菌成分,如抗生素等,则装量一定要准确。
2) 固体分装:分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。分装三角量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
3) 半固体分装:试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
图1-1 培养基的分装
A 漏斗分装装置 ;B 自动分装装置
1 铁架 ;2 漏斗 ;3孔胶管 ;4弹簧夹 ;5玻璃 ;6流速调节 ;7 装量调节 ;8开关
分装过程中,注意不要使培养基沾在管(瓶)口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(6) 加塞
图1-2 棉塞的制作
培养基分装完毕后,在试管口或三角烷瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等),棉塞的作用有二:一方面阻止外界微生物进入培养基,防止由此而引起的污染;另一方面保证有良好的通气性能,使培养在里面的微生物能够从外界源源不断地获得新鲜无菌空气。因此棉塞质量的好坏对实验的结果有着很大的影响。一只好的棉塞,外形应象一只蘑菇,大小、松紧都应适当。加塞时的棉塞的总长度的3/5应在口内,2/5在口外。
(7) 包扎
加塞后,将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
(8) 灭菌
将上述培养基以0.103MPa,121℃,20min高压蒸气灭菌。
(9) 搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右〔以防斜面上冷凝水太多〕,将试管口端捆在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜 。
(10) 无菌捡查
将灭菌培养基放人37℃的温室中培养24—48h,以检查灭菌是否彻底。
2.高氏I号培养基配制方法
(1) 称量和溶化
按配方先称取可溶性淀粉、放入小烧杯中,并用少量冷水将淀粉调成糊状,再加入少于所需水量的沸水中,继续加热,使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分依次逐一溶化。对微量成分FeSO4•7H2O可先配成高浓度的贮备液按比例换算后再加入,方法是先在100mL水中加入1g的FeSO4•7H2O配成0.01g/ml,再在1000mL培养基中加1mL的0.0l g/m1的贮备液即可。待所有药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基,其溶化过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制方法。
(2) pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基配制方法。
3.马铃薯培养基配制方法
取去皮马铃薯200g,切成小块,放入1500mL的烧杯中煮沸30min,注意用玻棒搅拌以防糊底。然后用双层纱布过滤,取滤液加糖(酵母菌用葡萄糖,霉菌用蔗糖),加热煮沸后加入琼脂,继续加热融化并补足失水。再按前所述,进行分装、加塞、包扎、0.1MPa灭菌20 min。
4.察氏培养基配制方法
方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
实验结果及讨论
针对实验原理、步骤、现象进行讨论。
实验作业(选做3题)
1.牛肉膏应置于何种容器中称量为宜?
2.配制高氏合成一号培养基时,可溶性淀粉需经什么处理后才能倒入到沸水中?
3.何谓培养基的自然pH?
4.培养基配好后,为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的
5.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么?
6.配制合成培养基加入微量元素时最好用什么方法加入?天然培养基为什么不需要另加微量元素?
7.有人认为自然环境中微生物是生长在不按比例的基质中,为什么在配制培养基时要注意各种营养成分的比例?
8.你配制的高氏I号培养基有沉淀产生吗?说明产生或未产生的原因。
9.细菌能在高氏I号培养基上生长吗?为了分离放线菌,你认为应该采取什么措施?
TSA培养基和TSB培养基在成分上有何区别?
1、培养内容不同:
TSB对某些较难生长的细菌均能生长,可用于各种细菌的增殖培养。
TSA常用于培养一般的细菌。
2、含量不同:
TSA培养基的成分为:T是胰蛋白胨,S是大豆,A是琼脂。
TSB培养基的成分为:T是胰蛋白胨,S是大豆,B是肉汤。
胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB):胰蛋白胨 1.5%(g/100ml);大豆蛋白胨 0.5%(g/100ml);氯化钠 0.5%(g/100ml)用蒸馏水配制而成,调节pH为7.2±0.2,经121℃压力蒸汽灭菌后使用。
扩展资料:
配置原则:
选择适宜的营养物:
总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
就微生物主要类型而言,有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分,培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基培养细菌,用高氏I号合成培养基培养放线菌,培养酵母菌一般用麦芽汁培养基,培养霉菌则一般用查氏合成培养基。
营养物质浓度及配比合适:
培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用,例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑菌或杀菌作用。
控制pH条件:
培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。
控制氧化还原电位:
不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。
F值与氧分压和pH有关,也受某些微生物代谢产物的影响。在pH相对稳定的条件下,可通过增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培养基的氧分压,或加入氧化剂,从而增加F值;在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低F值。
参考资料:百度百科-培养基