RIPA(中)裂解液
发布网友
发布时间：2024-10-24 12:59
共1个回答
热心网友
时间：2024-10-29 16:59
RIPA（中）裂解液是一种广泛使用的细胞组织快速裂解液，适用于动物、植物、真菌和细菌等样本。其主要成分包括Tris(pH 7.4)、NaCl、1% NP-40、0.5% 脱氧胆酸钠、0.1% SDS、原钒酸钠、氟化钠、EDTA、leupeptin等多种抑制剂，旨在有效抑制蛋白降解。裂解液可用于测定蛋白浓度，但因含有较高浓度的去垢剂，不适合使用Bradford法测定。RIPA（中）裂解液包装条件为-20℃保存，有效期一年。
操作步骤包括：对于贴壁培养细胞，首先在室温下融解混匀裂解液，添加PMSF至终浓度为1mM。去除培养液后清洗细胞，低速离心弃上清，加入含PMSF的裂解液至每孔150～250μl，并轻拍细胞使充解。然后离心取上清，进行后续SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀操作。对于悬浮培养细胞，操作过程与贴壁细胞相似，但需要先离心悬浮细胞，然后加入裂解液轻拍裂解细胞。对于组织样本，将组织剪切成小碎片，用液氮或超低温冰箱冷冻后迅速研磨，加入裂解液并冰上或4℃裂解。最后离心取上清，进行后续实验。
操作注意事项包括：避免过多的反复冻融，建议分装保存；裂解细胞的步骤需在冰上或4℃进行；建议在临用前数分钟内加入PMSF；对于大团细胞，必须分装成适量大小后再裂解；组织样本直接加入裂解液裂解更方便，但裂解效果可能不如匀浆器或研磨设备充分；细菌和酵母可先使用溶菌酶或破壁酶消化，再使用裂解液裂解。RIPA裂解液裂解产物中可能含有透明胶状物，属于正常现象，处理方法视实验需求而定。请在操作过程中穿实验服并戴一次性手套，确保安全。
请注意，RIPA（中）裂解液仅限于专业人员的科学研究用途，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，且不可存放在普通住宅内。
