发布网友 发布时间:9小时前
共1个回答
热心网友 时间:8小时前
在进行酶类分析时,制备分离胶与浓缩胶是关键步骤之一。具体而言,分离胶的组成包括30%的Acr与3.75%的缓冲液,而浓缩胶则由20%的Acr与2.5%的缓冲液构成。值得注意的是,根据实验需求,可以通过调整各成分的体积比例,以满足实验的不同需求。
操作流程主要分为以下几步:
1. 制备凝胶板并放置于电泳槽中,注入电极缓冲液后,安装样品梳。
2. 将样品匀浆后进行离心,取上清液加入样品处理液混匀,以备后续电泳使用。
3. 根据实验要求,利用微量进样器在样品槽中点样,随后连接电源,调节电流量和电压至指定值,直至溴酚蓝标志到达凝胶前沿。
4. 电泳结束后,取下玻板,揭掉胶布,抽出夹条,将胶板浸入染色液中。
过氧化物酶染色、酯酶同工酶显色、超氧化物歧化酶染色、过氧化氢酶同工酶染色、可溶性蛋白的染色等步骤依次进行,每一步都需严格按照操作指南进行,以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验结束后,需保存结果。可采用照相、扫描、绘图或干胶片等方式记录实验数据,以便后续分析与研究。在保存干胶时,需裁剪合适的玻璃纸,浸湿后放置于玻板上,进行染色与脱色处理,最后剪裁整齐保存。
通过上述详细的操作步骤与注意事项,实验人员可以顺利进行酶类分析的制胶与染色工作,为后续的实验结果提供坚实的基础。实验过程中,应时刻注意实验条件的控制,确保实验结果的准确性和可靠性,为科学研究提供有力支持。
浓缩胶SDS-PAGE:聚丙烯酰氨凝胶电泳,用于不同分子量的蛋白质/寡核苷酸的分离。